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1、葛根異黃酮對去卵巢大鼠血管內(nèi)皮功能的保護作用 摘要：目的觀察葛根異黃酮對去卵巢大鼠血管內(nèi)皮功能的影響及機制。方法雌性SD大鼠行雙側(cè)卵巢切除術(shù)后，分別灌胃給予150mg/kg和50mg/kg葛根異黃酮，時間為12周。酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清雌二醇和內(nèi)皮素含量。硝酸還原酶法檢測血清一氧化氮水平。在分離的各組動脈環(huán)標本上，觀察乙酰膽堿誘發(fā)的內(nèi)皮依賴性血管舒張反應和硝普鈉誘發(fā)的非內(nèi)皮依賴性血管舒張功能變化。Westernblot方法觀察各組內(nèi)皮組織樣品的內(nèi)皮型一氧化氮合酶表達變化。結(jié)果與假手術(shù)組比較，去卵巢組大鼠的血清E2、ET和NO水平出現(xiàn)顯著改變，而且其動脈環(huán)
2、對乙酰膽堿的舒張功能出現(xiàn)顯著性障礙，但對硝普鈉的舒張效應無影響。在去卵巢術(shù)后給予大小劑量的葛根異黃酮干預后，血清E2、ET和NO水平以及內(nèi)皮舒張功能，與去卵巢組比較有統(tǒng)計學意義。此外，葛根異黃酮也可上調(diào)去卵巢大鼠內(nèi)皮組織的eNOS表達。結(jié)論葛根異黃酮具有保護去卵巢大鼠血管內(nèi)皮功能作用，其機制與類雌激素樣作用、上調(diào)eNOS表達和降低ET水平等因素有關(guān)。 關(guān)鍵詞：葛根異黃酮；內(nèi)皮功能；雌激素；去卵巢大鼠 中圖分類號：R541R285.5文獻標識碼：A 大量研究表明，婦女在絕經(jīng)后失去雌激素對心血管的保護作用，心腦血管疾病發(fā)病率顯著增加[1]。雌激素替代療法
3、對改善絕經(jīng)后婦女的心血管疾病有效，但長期應用外源性激素，有增加子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌等發(fā)病率的危險[2]。藥理學研究表明葛根的主要有效成分異黃酮具有擴張血管，抑制血小板聚集和抗氧化等作用，其中葛根素、大豆甙和金雀異黃素等具有明顯的雌激素樣作用[3，4]。雌激素可通過影響內(nèi)皮細胞功能而實現(xiàn)對心血管的保護作用[5]，但同樣具有雌激素活性的葛根異黃酮對絕經(jīng)后婦女或雌激素缺乏動物內(nèi)皮功能的影響尚未見有報道。本研究主要觀察了葛根異黃酮對去卵巢大鼠血管內(nèi)皮功能的影響及其機制。 1材料與方法 1.1主要試劑和儀器葛根異黃酮由陜西中醫(yī)學院新藥研究中心提供；去甲腎上腺素、乙
4、酰膽堿和硝普鈉為Sigma公司產(chǎn)品；兔抗內(nèi)皮型一氧化氮合酶一抗由SantaCruz公司提供；Powerlab生物信號記錄系統(tǒng)為澳大利亞ADInstrument公司產(chǎn)品；雌二醇、內(nèi)皮素和一氧化氮檢測試劑盒由南京建成生物工程研究所提供?！ ?.2實驗動物和分組實驗選用雌性SD大鼠，體重250g～280g，適應性喂養(yǎng)1周后，隨機分成4組：假手術(shù)組、卵巢切除組、卵巢切除+葛根異黃酮大劑量組、卵巢切除+葛根異黃酮小劑量組。實驗動物由西安交通大學實驗動物研究中心提供?！ ?.3去卵巢大鼠模型和給藥方法大鼠2%戊巴比妥鈉腹腔麻醉后，下腹部術(shù)區(qū)剪毛，仰臥位固定。嚴格消毒后
5、，無菌條件下行下腹正中切口，逐層分離進入腹腔，辨別出雙側(cè)卵巢后，完整切除，并逐層縫合切口。假手術(shù)組大鼠行相同手術(shù)過程，但不切除卵巢。術(shù)后第3天，將卵巢切除大鼠隨機分為3組，給予藥物灌胃。大劑量和小劑量治療組分別給予葛根異黃酮150mg/kg和50mg/kg，給藥體積為1mL/100g體重，時間為12周。對照組大鼠給予等體積生理鹽水。大鼠在溫度22℃，濕度30%～40%的環(huán)境中飼養(yǎng)，自由飲水和攝食?！ ?.4血清學檢測各組大鼠經(jīng)以上藥物處理后，2%戊巴比妥鈉腹腔麻醉，下腔靜脈取血，分離血清，使用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清雌二醇和內(nèi)皮素含量。硝酸還原酶法檢測一氧化
6、氮水平。以上試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。 1.5主動脈血管內(nèi)皮功能的檢測分離各組大鼠的主動脈，置于預冷的Kerb’s液中。將附著動脈的結(jié)締組織剝離后，切制為寬約3mm的動脈環(huán)形標本。在含Kerb’s液的37℃浴槽中，將動脈環(huán)懸掛，另一端連于張力換能器，并持續(xù)給予95%O2+5%CO2的混合氣。張力換能器連接于Powerlab生物信號系統(tǒng)，記錄和分析動脈環(huán)張力變化情況。當動脈環(huán)穩(wěn)定于基線后，浴槽中加入去甲腎上腺素收縮血管環(huán)，待動脈環(huán)收縮達平衡狀態(tài)后，分別加入濃度為mol/L的內(nèi)皮依賴性血管舒張劑乙酰膽堿，觀察血管的舒張反應。然后，洗脫血管，重新平
7、衡至基線，改用累加濃度為10-9～10-5mol/L的非內(nèi)皮依賴性血管舒張劑硝普鈉重新舒張血管，測定各組非內(nèi)皮依賴性血管舒張功能?！ ?.6Westernblot提取蛋白后Bradford法測定蛋白含量。上樣后，SDSAGE凝膠電泳分離蛋白。電泳結(jié)束后，濕轉(zhuǎn)法將蛋白從聚丙酰胺凝膠轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜。室溫下，脫脂奶粉封閉2h。兔抗內(nèi)皮型一氧化氮合酶一抗，4℃孵育過夜。TBS漂洗3次后，加入標記辣根過氧化物酶的IgG二抗，室溫孵育30min。漂洗3次膜后，在暗室里加入ECL顯色2min，并曝光膠片min，采用圖像分析系統(tǒng)進行分析蛋白印跡結(jié)果?！ ?.7統(tǒng)計學處
8、理計量資料以均數(shù)±標準差表示，組間比較采用單因素方差分析，使用si
