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1、怎樣正確使用細胞培養(yǎng)耗材一、玻璃器材常用的玻璃器材有各種規(guī)格的玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、吸管、離心管等。無論是初次使用還是培養(yǎng)后重復使用的玻璃器材均需要進行消毒處理。首次使用的玻璃器材應先用自來水初步刷洗，然后用稀鹽酸溶液（1%）浸泡過夜，再用自來水沖洗，最后處理方法與重復使用的器皿的處理。重復使用的玻璃器皿的處理步驟：（1）刷洗。用軟毛刷和優(yōu)質(zhì)中性洗滌劑刷洗，去除器皿內(nèi)外表面的雜質(zhì)。刷洗時注意不要用力過重，以防損壞器皿內(nèi)表面光潔度，影響細胞生長；也不能留有死角。器皿數(shù)量大時，可使用超聲波清潔裝置，沖洗干凈后晾干。（
2、2）清潔液處理。將刷洗晾干后的玻璃器皿放入硫酸-重鉻鉀清潔液中。清潔液配方如下，見下表：表??清潔液配方?名????稱*清?潔?液?濃?度25%(弱液)50%(次強液)75%(強液)?重鉻酸鉀1000g1000g1000g?濃硫酸2500mL5000mL7500ML?蒸餾水(或廢液)7500Ml5000mL2500mL該清潔液具有高度腐蝕性，操作時必須穿長筒膠靴，戴防酸橡皮手套，圍裙和眼鏡，以防清潔液濺出而灼傷。在配液時還需注意將酸緩慢放入水中，以防酸遇水放熱產(chǎn)生酸濺出或使玻璃及陶制容器裂開而使清潔液外泄。切勿將水
3、加入酸中，以防酸濺出。常用清潔液為75%和50%兩種。將玻璃器皿放入時最好裝入塑料網(wǎng)袋內(nèi)，再浸入清潔液中，玻璃瓶內(nèi)不要殘留氣泡。一般浸泡12~24小時后取出。在清潔液中取出的器皿先用自來水沖洗10次以上，再用單蒸水沖洗三次以上，最后用雙蒸水（或去離子水）沖洗1~2次，晾干，包裝殺菌。一般用121℃磅高壓蒸氣滅菌20分鐘。玻璃濾器使用后及時用自來水沖洗濾器表面的剩余物，然后用單蒸水浸泡，除去濾板內(nèi)堵塞雜物，若用濾膜則將濾膜丟棄，加4N鹽酸浸泡12小時以上，用自來水沖洗，再用單蒸水抽濾2次，雙蒸水(或去離子水)抽濾沖洗
4、、包裝、121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。也可用5%潔消精浸泡20分鐘后，再按上述方法沖洗和滅菌。二、塑料器材體外培養(yǎng)細胞中塑料器皿的使用越來越多，有進口的，也有國產(chǎn)的。主要有多孔培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶及吸嘴。多孔培養(yǎng)板有4孔、6孔、24孔、96孔等規(guī)格可供選擇。多數(shù)為進口產(chǎn)品，已消毒滅菌密封包裝，使用時只需打開即可。有一次性使用的，也有反復使用的。在我國不少實驗室，由于經(jīng)費有限，經(jīng)過清洗和消毒滅菌再使用的較多。塑料器皿若使用后，先用自來水浸泡沖洗、晾干，再用3%HCl或2%NaOH溶液浸泡過夜，用自來水充分沖洗，或先
5、用2%NaOH處理之后再用3%HCl浸泡30分鐘，最后用自來水沖洗干凈，并用雙蒸水沖洗3次以上，晾干。消毒采用紫外線直接照射或輻照滅菌辦法。清洗時要防止產(chǎn)生劃痕，以免影響細胞的貼附性。所以，培養(yǎng)要求較高的細胞的塑料器材，最好一次性使用。三、橡皮器材應選擇質(zhì)軟、耐高溫、毒性小的橡皮制品(最好是硅制品)做各種瓶或試管的塞子、蓋子。新購置的橡皮制品，用自來水沖洗去除其表面粉粒和污物。先用5%氫氧化鈉煮沸15分鐘，用自來水沖洗8次，再用4%鹽酸煮沸15分鐘，用自來水沖洗8次，單蒸水沖洗3次，雙蒸水(或去離子水)沖洗一次，晾
6、干后包裝或置于鋁盒內(nèi)，用121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。已用過的橡皮制品，先用自來水沖洗干凈，然后用洗衣粉加熱煮沸10分鐘后，用自來水邊沖邊用力攪動，以充分洗凈殘余洗衣粉，然后用蒸餾水煮沸2次，每次15分鐘，再用單蒸水沖洗2次，必要時還要用雙蒸水(或去離子水)沖洗一次，晾干后包裝或放于鋁盒內(nèi)，用121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。四、金屬器材細胞培養(yǎng)中需用多種金屬器材，用于解剖、取材、剪切組織及持取物件等，常用的有剪刀、鑷子、手術刀、解剖刀、血管鉗、組織鑷、眼科鑷及各種型號針頭等。新的金屬器材，先用紙擦去表面的油脂，再用洗
7、衣粉煮沸，或用1%碳酸氫鈉煮沸15分鐘，擦干后再用95%酒精紗布擦干，包裝或置鋁盒內(nèi)于121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。已用過的金屬器材，及時用酒精棉球擦干凈，包裝入鋁盒內(nèi)于121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。五、其他物品紗布先用自來水洗凈后，再用單蒸水沖洗，然后用單蒸水煮沸2次，每次15分鐘，并經(jīng)常用長鑷子翻動，再用單蒸水洗2次，晾干后折成八層包裝，用121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。注射器的針頭使用后，立即用自來水（或來蘇爾水）沖洗數(shù)次，沖洗出針頭內(nèi)的剩余物，以免堵塞針頭，然后用單蒸水洗2~3次，再用95%酒精沖洗3次，包裝
8、或置鋁飯盒內(nèi)121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。用于細胞培養(yǎng)過程中的各種人工合成培養(yǎng)液、緩沖液和酶濾液等也需要進行除(滅)菌處理。緩沖液常用高壓蒸氣消毒。血清用56℃水浴滅活30分鐘。人工合成培養(yǎng)液等酶溶液用過濾除菌。安裝濾器時要防止濾膜裝偏而導致過濾失效，過濾時力量不能過大、過猛，以免濾膜破裂。濾液量多，用抽濾式或加壓式（正壓式）過濾裝置。濾液量少，可選用2.5
