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《抗Ⅱ型登革病毒蛋白抗體的制備和特點(diǎn)分析.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、微生物與感染JournalofMicrobesandInfections,June25,2015,10(3)．147-153http：fjmi,fudan,edu．cn·147·——·論著·抗Ⅱ型登革病毒蛋白抗體的制備和特點(diǎn)分析魏建春，崔曉云，吳娜，安靜首都醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系微生物學(xué)教研室，北京100069摘要：本研究旨在制備和鑒定小鼠抗Ⅱ型登革病毒(DENV一2)10種蛋白的抗體，為后續(xù)相關(guān)研究提供實(shí)驗(yàn)材料。利用真核表達(dá)載體pReceiver構(gòu)建DENV一210種蛋白的重組質(zhì)粒，提取質(zhì)粒DNA，肌內(nèi)注射免疫小鼠，共免疫4
2、次。末次免疫后2周取小鼠血清，利用DENV一2感染的Vero細(xì)胞和DENV一2各蛋白的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、間接免疫熒光法(IFA)和蛋白免疫印跡法評(píng)價(jià)免疫效果，分析抗體的特點(diǎn)。DNA免疫小鼠后獲得抗DENV-210種蛋白的抗血清，抗體效價(jià)波動(dòng)于1：400~1：16127之間，以抗E蛋白抗體效價(jià)最高，達(dá)1：16127，而抗NS3、NS4b、NS5蛋白抗體效價(jià)較低，僅為1：400。利用DENV-2感染的Vero細(xì)胞和穩(wěn)定表達(dá)病毒蛋白的EAhy926細(xì)胞進(jìn)行IFA染色，抗DENV-2各蛋白的抗血清均可特異性識(shí)別
3、DENV．2抗原。蛋白免疫印跡結(jié)果顯示，抗E、NS1、NS4b和NS5蛋白抗體能識(shí)別熱變性蛋白，其他抗血清未呈現(xiàn)陽性反應(yīng)條帶。本研究提示，DNA免疫小鼠所獲得的抗DENV-2各蛋白抗體能特異性識(shí)別自然感染或模擬自然感染狀態(tài)下的DENV-2蛋白，可為后續(xù)相關(guān)研究提供工具，也表明DNA免疫法可作為抗體制備的一種策略。關(guān)鍵詞：登革病毒；結(jié)構(gòu)蛋白；非結(jié)構(gòu)蛋白；抗體；EAhy926細(xì)胞Preparationandcharacteristicanalysisofanti—denguevirusserotype2antibodiesWEIJian-
4、Chun，CUIXiao-Yun，WUNa，ANJingDepartmentofMicrobiology，SchoolofBasicMedicalSciences，CapitaIMedicalUniversity，Beijing100069，ChinaAbstract．Eukaryoticexpressionvectorcontainingdifferentproteins(C，M，EandNS1—5)ofdenguevirusserotype2(DENV．2)wereconstructedandintramuscularlyinje
5、cteddirectlytomicefordevelopingantibodiesagainstDENV一2．Twoweeksafterthefourthimmunization。serawerecollectedandtheimmuneeffectswereevaluatedbyenzyme．1inkedimmunosorbentassay(ELISA)，indirectimmunofluorescenceassay(IFA)andWesternblotting．Specificantibodiescouldbeobtainedby
6、DNAimmunization，andthetitersoftheseantibodiesfluctuatedbetween1：400．1：16127．Ofthose．theantibodyagainstproteinEshowedthehighesttiterat1：16127whereastheantibodiesagainstproteinsNS3，NS4bandNS5hadthelowesttiterat1：400．TheresultsshowedthatallantibodiesacquiredbvDNAimmunizati
7、oncouldproducespecificimmunofluorescentreactionswhentestedusingDENV一2-infectedVerocells．suggestingthatantibodiespreparedbyDNAimmunizationcouldspecificallyidentifynaturallyinfectedDENV一2．AntibodiesagainstproteinsE，NS1，NS4bandNS5couldalsoidentifyheat．denaturedproteins．The
8、resultsgeneratedfromthisstudyprovidedthebaseforfurtherresearch．基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金(81301435、81401676、81471957)通信作者：安
