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1、生物技術(shù)通訊LETI'ERSINBIOTECHNOLOGYVo1．21No．6Nov．，2010827doi：10．3969~．issn．1009—0002．2010．06．018研究報(bào)告抗P一選擇蛋白人源性單克隆抗體的制備李鶴一，王雙，林建波，孫志偉，何建勇1．軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所，北京100071；2．沈陽(yáng)藥科大學(xué)，遼寧沈陽(yáng)110016[摘要]目的：獲得人源性抗P一選擇蛋白(selectin)特異性抗體，為相關(guān)疾病治療奠定基礎(chǔ)。方法：在HEK293細(xì)胞中真核分泌表達(dá)人P一選擇蛋白功能性片段，以
2、此蛋白片段作為抗原，利用本室構(gòu)建的大容量全合成人源性噬菌體抗體庫(kù)進(jìn)行篩選，經(jīng)過(guò)3輪固相篩選后，陽(yáng)性克隆得到富集；將其中富集效果最好的一株單鏈抗體A1改造成全抗體(IgG1)，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染H293細(xì)胞后，抗體得到表達(dá)；表達(dá)后在全抗體水平上用ELISA和Western印跡分別驗(yàn)證了A1抗體的特異性，并通過(guò)非競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法初步測(cè)定這株抗體的親和力。結(jié)果：3輪篩選得到3株特異性噬菌體抗體，其中富集效果最好的單鏈抗體A1改造成全抗體形式后特異性良好，抗體親和力Kd=2x10mol／L。結(jié)論：篩選得到一株特異性較
3、好的抗P一選擇蛋白人源性單克隆抗體A1，其特異性和親和力較好，有繼續(xù)開(kāi)發(fā)的價(jià)值。[關(guān)鍵詞]P一選擇蛋白；真核表達(dá)；噬菌體抗體；篩選；特異性；親和力[中圖分類(lèi)號(hào)]R392．1；Q78[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1009—0002(2010)06—0827—07ThePreparationofHumanAnti-P-SelectinMonoclonalAntibodies，WANGShuan~，LINJian-Bo，SUNZhi-Wei，HEJian-Yon~1．BeijingInsitituteofBiot
4、echnology，Beijing100071；2．ShenyangPharmaceuticalUniversity，Shenyang110016；China[Abstract]Objective：Toobtainanti-humanP-selectinmonoclonalantibodies，andlayabasisforthetherapyofP-selectinrelateddiseases．Methods：P-selectinfunctionalsegmentwasexpressedsecretl
5、ybyHEK293cells，whichwasusedasantigenforantibodypanning．Andthenscreeningfromthelargefullysynthetichumanantibodylibraryconstructedinourlab，severalcandidatesofantibodiesspeciallybindingtoP-selectinwereobtained，after3roundsofsolidpanning，thepositivecloneswere
6、enriched．Next，onecandidatesA1，whichwasenrichedsuffi—ciently，wastransferredfromscFvtowholeantibody(IgG1)．Atlast，usingELISAandWesternblottoidenti~thespecificityofA1．Alsousingnon-competitiveELISAmethodtodetectetheaffinityofA1．Results：Afterpanning，wegot3difer
7、entcandidates，andchangedoneofthemintowholeantibodyform．TheELISAandWesternblotresultsshowedthatthespecificityofA1wasexcellent．Furthermore，theaffinityofA1wasdetectedbynon-com—petitiveELISAmethodandtheaffinityconstantI(dwas2x10mol／L．Conclusion：Wegotanexcelle
8、ntanti—hu—manP—selectinantibodycandidant，whichprovedtohavewellspecificityandaffinity，SOithaspotentialvaluetogoonstudy．[Keywords]P-selectin；eukaryoticexpression；phagedisplayedantibody；specificity；afinityP一選擇蛋白(select
