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《基因C型鴨甲肝病毒競爭ELISA抗體檢測方法的建立.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第37卷第3期中國預防獸醫(yī)學報Vo1．37．NO．32015年3月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineMar．2015doi：10．3969~．issn．1008-0589．2015．03．12基因C型鴨甲肝病毒競爭ELISA抗體檢測方法的建立何美琳，張煥容，程方明，楊曉農1,2，岳華，f1．西南民族大學生命科學與技術學院，四川成都610041；2．西南民族大學動物醫(yī)學四川I省高等學校重點實驗室，四川成都610041)摘要：為建立檢測基因c型鴨甲肝病毒(DHAV．c)血清抗體的方法，本研究以純
2、化的DHAV．C作為包被抗原，抗DHAV．C單克隆抗體(MAb)5E3—9與待檢血清競爭結合抗原，采用方陣法確定包被抗原、MAb及待檢血清的最佳工作濃度，經過對反應條件的優(yōu)化，建立了DHAV．C抗體的競爭ELISA檢測方法。該方法僅對DHAV—C血清檢測為陽性，與DHAV．A、鴨圓環(huán)病毒、鴨乙型肝炎病毒等相關病原的鴨陽性血清無交叉反應。敏感性試驗表明，標準陽性血清1：128倍稀釋時，檢測結果仍為陽性，比中和試驗靈敏性更高。批內批間變異系數(shù)分別為4．64％～5．21％和6．02％～8．68％，具有良好的重復性。與中和試驗比較，陽性符合率為100％
3、(15／15)，陰性符合率為77．8％(14／181。本研究基于純化的DHAV．C及其特異性MAb建立的MAb競爭ELISA檢測方法可以用于DHAv．C流行病學調查以及抗體的檢測。關鍵詞：基因C型鴨甲肝病毒；單克隆抗體；競爭ELISA；抗體檢測中圖分類號：$852．65文獻標識碼：A文章編號：1008—0589(2015)03—02l1-05DevelopmentofacompetitiveELISAfordetectingantibodiesagainstgenotypeCduckhepatitisAvirusbasedonthemonocl
4、onalantibodyHEMei-lin，ZHANGHuan—rong，，CHENGFang—ming，YANGXiao-nong，，YUEHua’(1．CollegeofLifeScienceandTechnology，SouthwestUniversityforNationalities，Chengdu610041，China；2．KeyLaboratoryofVeterinaryMedicineofUniversityinSichuanProvince，SouthwestUniversityforNationalities，Chengd
5、u610041，China)Abstract：TheobjectiveofthisstudyistodevelopacompetitiveELISAtodetecttheantibodyagainstduckhepatitisAvirusgenotypeC(DHAV—C)．ThepurifiedDHAV-Cwasusedascoatingantigen，andDHAV—CspecificMAb5E3-9ascompetitiveantibodyagainstDHAV-Cantibody．Undertheoptimizedreactingcond
6、itions，including10mLpurifiedDHAV—Ccoatingantigen，1：800dilutionofMAb5E3—9dilutingthetestserl／mto1：2ratio，and1：5，000dilutionofHRPconjugatedgoatanti-miceIgGwiththepositivecut-ofvalueofinhibitionratio36．86％．Thespecificitytestshowedthattherewerenocrossreactionwithduckanti—seraofa
7、lltestedrelativepathogens，suchasduckhepatitisAvirusgenotypeA(DHAV—A)，duckcircovirus，duckhepatitisBvirusandother6pathogens．Thesensitivitytestshowedthat1：64dilutedDHAV—CpositiveseracouldbedetectedpositivewiththisdevelopedcompetitiveELISA．The15neutralizationtestdetectedpositive
8、serawereallpositivewhentheyweredetectedbythedevelopedcompetitiveELISA，while
