熱毒寧注射液治療大鼠急性放射性肺損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

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1、臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)雜志2015年2月B第2卷第5期828JournalofClinicalMedicalLiteratureFeb．B2015、1．2NO．5熱毒寧注射液治療大鼠急性放射性肺損傷的實(shí)驗(yàn)研究隋曉梅，朱勤偉，楊兆祿，孫秀梅，張啟富，魏永強(qiáng)(1．濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院放療科，山東濰坊261031；2．濰坊市中醫(yī)院急診科，山東濰坊261041)【摘要】目的為臨床應(yīng)用熱毒寧注射液治療放射性肺炎提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法45只雄·I~Wistar大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、熱毒寧組。用6MV-X線(xiàn)直線(xiàn)加速器對(duì)大鼠雙肺

2、進(jìn)行單次照射15Gy，照射后第l天開(kāi)始給藥，連續(xù)用藥28天。取大鼠右上肺組織行HE染色觀(guān)察病理改變；western．blot法檢測(cè)各組大鼠第4周TNFct和IL．6的表達(dá)。結(jié)果HE染色結(jié)果顯示：模型組大鼠肺組織第1周便出現(xiàn)放射性肺炎改變，第4周放射性肺炎最顯著；熱毒寧組大鼠肺組織放射性肺炎反應(yīng)較模型組明顯減輕。western-blot結(jié)果顯示：空白組、熱毒寧組大鼠肺組織比模型~TNFa和IL一6顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。結(jié)論熱毒寧注射液可通過(guò)抑制致炎細(xì)胞因子TNFa和IL-6的表達(dá)，起

3、到治療放射性肺炎的作用。【關(guān)鍵詞】放射性肺炎；熱毒寧；炎癥反應(yīng)；細(xì)胞因子【中圖分類(lèi)號(hào)】17,285．5【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】ISSN．2095—8242．2015．05．828．02放療導(dǎo)致的放射性肺損傷是胸部腫瘤放療最常見(jiàn)的并存，以備western．blot法檢測(cè)肺組織TNFa和IL．6的表達(dá)。發(fā)癥之一，目前臨床采用的防治放射性肺損傷的藥物以糖1．7指標(biāo)檢測(cè)皮質(zhì)激素為主，其療程長(zhǎng)，副作用大。熱毒寧注射液是一1．71HE染色觀(guān)察病理改變種純中藥制劑，具有清熱、解毒、抗感染等作用，且安全取甲醛固定肺

4、組織，石蠟包埋，5um連續(xù)切片，HE染無(wú)毒副作用，在臨床上被廣泛應(yīng)用于上呼吸道感染及急性色，光鏡觀(guān)察肺組織炎性病理變化。支氣管炎。本研究觀(guān)察熱毒寧注射液對(duì)大鼠急性放射性肺l_7．2western-blot觀(guān)察TNFa和IL．6蛋白表達(dá)損傷的療效并探討其機(jī)制。取液氮保存肺組織，提取總蛋白，SDS．PAGE電泳分離蛋白，選取目的條帶進(jìn)行濕轉(zhuǎn)膜，轉(zhuǎn)膜后加一抗4℃過(guò)1材料與方法夜，TBST洗膜3次后，辣根過(guò)氧化物酶HRP標(biāo)記的二抗孵育1．1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物1h，暗室內(nèi)顯色曝光，圖像分析。健康SPF級(jí)Wistar大鼠45

5、只，雄性，體重(200±20)g，1．8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法由山東魯抗醫(yī)藥公司提供(許可證號(hào)：SOXK~20080002)。所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS18．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資1．2藥品與試劑料以“±”表示，采用單因素分析，以P<0．05為差異有熱毒寧注射液(江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。準(zhǔn)字Z20050217)10ml／支；試劑：大鼠腫瘤壞死因子．0【(TNF—G【)和大鼠白細(xì)胞介素．6(IL一6)、westernblot及2結(jié)果ELISA試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。2．1各組大鼠肺

6、組織HE染色病理學(xué)改變1．3儀器光鏡下：空白組大鼠肺泡間隔完整，無(wú)斷裂及增厚美國(guó)瓦里安21EX直線(xiàn)加速器、TDGC(zD)，高速低溫現(xiàn)象，肺組織結(jié)構(gòu)清晰，肺泡壁薄而均勻，肺泡腔大。模離心機(jī)購(gòu)自德國(guó)Hemeus公司，微量電子天平購(gòu)自德國(guó)Stratos型組大鼠肺組織于第1周便出現(xiàn)明顯炎癥反應(yīng)，第4周炎癥公司，凝膠圖像分析系統(tǒng)購(gòu)自美[~Alphainnotech公司。反應(yīng)最為顯著，表現(xiàn)為肺內(nèi)充血、支氣管周?chē)?xì)血管充1．4動(dòng)物分組及造模血、肺泡間質(zhì)水腫、肺泡內(nèi)充滿(mǎn)大量滲出液、大量的成簇45只Wistar雄性大

7、鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為空的慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡腔變小。熱毒寧組第4周大鼠肺組白組、模型組、熱毒寧組各15只。除空白組外其余兩組大織放射性肺炎反應(yīng)較模型組明顯減輕。鼠均進(jìn)行急性放射性肺炎造模：2％戊巴比妥鈉1．2ml／kg2．2western-blot檢測(cè)結(jié)果腹腔注射麻醉后固定大鼠，用6MV-X線(xiàn)直線(xiàn)加速器對(duì)大鼠空白組大鼠肺組織比模型組TNFct和IL一6顯著降低，差進(jìn)行單次全胸照射15Gy，源皮距98．5cm(大鼠胸部體厚異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸

8、穿照射，用多葉光柵屏蔽大鼠頭部及體較，TNFct和IL．6蛋白的表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義部，照射劑量率為300cGy／min。(P<0．05)。1．5給藥方法及劑量3討論于照射后第1天開(kāi)始給藥，熱毒寧組給予熱毒寧在胸部腫瘤放療過(guò)程中，肺組織會(huì)受到一定劑量的照2．5ml／kg·d，模型組和空白組給予相當(dāng)量的生理鹽水，灌胃射，造成不同程度的放射性肺損傷。分子生物學(xué)的研究進(jìn)給藥，1次／d，連續(xù)給藥28天。展進(jìn)一步闡述了放射性肺損傷的發(fā)生機(jī)制