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《毛尖蘑粗多糖對H22肝癌小鼠TNF-α和IL-2表達的影響.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、HEILONGJIANGMEDICINEANDPHARMACYAug．2015，Vo1．38No．4·37·毛尖蘑粗多糖對H22肝癌小鼠TNF一和IL一2表達的影響①羅文哲，王建杰，呂冬霞(佳木斯大學基礎醫(yī)學院，黑龍江佳木斯154007)摘要：目的：研究毛尖蘑粗多糖對H22肝癌小鼠TNF—和IL一2表達的影響。方法：建立小鼠肝癌模型，并隨機分為4組：陰性對照組、陽性對照組、毛尖蘑粗多,f~(20mg／mL)、高劑量組(40mmL)，每組lO只。于接種后24h給予不同處理，每日1次，腹腔注射。14d后，采用ELISA法測定血清中TNF一儀與IL
2、一2水平，RT—PCR對外周血單個核細胞(PBMC)TNF—Ot與IL一2mRNA表達進行檢測。結果：模型對照組血清中IL一2水平低于正常對照組(P<0．05)，TNF一儀水平變化不明顯，毛尖蘑粗多糖組TNF—和IL一2水平高于模型對照組(P<0．05)。PBMC中TNF—O／．和IL一2mRNA在毛尖蘑粗多糖組高于模型對照組(P<0．05)。結論：毛尖蘑粗多糖能促進TNF一和IL一2分泌而發(fā)揮了抗腫瘤作用。關鍵詞：毛尖蘑粗多糖；肝癌；細胞因子中圖分類號：R737．9文獻標識碼：A文章編號：1008—0104(2015)04—0037—02毛
3、尖蘑，別名金子蘑，是一種罕見的野生珍稀食分成4組，每組以不同的處理因素進行干預，一組為用真菌。在前期研究工作中，我們對毛尖蘑中的粗腫瘤對照組(對照組)：無任何干預；一組為陽性藥多糖進行了提取，并發(fā)現(xiàn)其對H22荷瘤小鼠的腫瘤物對照組(CTX組)：給予CTX，25mg／kg·d，每日1生長有抑制作用l2]，但對免疫功能的影響尚未見次，腹腔注射；其他兩組為毛尖蘑粗多糖低劑量、高報道。因此，本研究通過建立小鼠H22肝癌模型，劑量組：低劑量組給予毛尖蘑粗多糖20mg／mL，高采用ELISA、RT—PCR方法，對荷瘤小鼠外周血中劑量給予40mg／mL，腹
4、腔注射，每日1次，連續(xù)14TNF一儀與IL一2水平、以及相應的mRNA進行了d。每日觀察，隔日稱重。檢測，以闡明毛尖蘑粗多糖如何影響H22肝癌小鼠1．2．3檢測荷瘤小鼠血清TNF一僅、IL一2的水平的免疫功能，為毛尖蘑粗多糖的抗腫瘤作用提供理各組小鼠14d后，外周血采血，4℃、3，000r／論依據(jù)。min離心10rain，吸取血清，ELISA法檢測各組小鼠1材料與方法血清中TNF—d和IL一2的水平，實驗步驟按試劑1．1材料盒說明書操作。毛尖蘑子實體購于大興安嶺呼瑪縣韓家園林業(yè)1．2．4RT—PCR檢測TNF—、IL一2mRNA的表達局松濤鹿
5、苑公司。環(huán)磷酰胺(CTX)為上海華氏制藥應用淋巴細胞分離液分離小鼠的外周血中的有限公司天平制藥廠產(chǎn)品。紅細胞裂解液、淋巴細PBMC，調整細胞濃度至2×10。個細胞／mL，于24胞分離液購于上海新睿生物科技有限公司。TNF一孔細胞培養(yǎng)板中各加0．5mL的細胞懸液，在培養(yǎng)箱d、IL一2酶聯(lián)免疫雙抗體夾心(ELISA)試劑盒購于中(5％CO、37℃)培養(yǎng)48h。加人Trizol，按照說明深圳賽保爾生物藥業(yè)有限公司?？俁NA提取試劑書提取細胞的總RNA。應用一步法反轉錄試劑盒盒、反轉錄cDNA合成試劑盒購于Promega生物公轉錄，PCR擴增，25為
6、總反應體積。TNF—引司。Trizol試劑購于Invitrogen公司。13一actin多克物序列(460bp)：上游：5’一TGGCCCAGACCCTCA一隆抗體來自北京北京康為世紀生物科技有限公司。CA一3’，下游：5’一TGcccGGAcTccGTGAT一3’；昆明種小鼠雌性為佳木斯大學實驗動物中心提供。IL一2引物序列(502bp)：上游：5、一ATGTACAG小鼠H22肝癌細胞株為哈爾濱醫(yī)科大學腫瘤研究CATGCAGCTCGCATC一3、，下游：5、一GGCTYGTI"一所惠贈。GAGATGATGCmGACA一3、；B—actin序
7、列：上游：1．2方法5、一ATGGGTCAGAAGGACTCcTATGTGG一3、，下游：1．2．1毛尖蘑粗多糖提取5、一CGCCTAGAAGCACTFGCGGTG一3、0TNF一僅根據(jù)文獻報道，采用熱水浸提方法改良]。的反應條件為94cC變性30S，55cI=退火30s，72℃1．2．2建立小鼠肝癌模型以及藥物處理延伸30S，共30個循環(huán)，72℃延伸5min。4oC終將小鼠腹水瘤以生理鹽水制成腫瘤細胞懸液，止。IL一2的反應條件為94℃變性30s，57oC退火濃度5×10。個／mL，注于小鼠右前肢腋下0．2mL／45S，72oC延伸30S，
8、共30個循環(huán)，72℃延伸7rain。只，制作荷瘤鼠模型，共40只。24h后，將小鼠隨機4℃終止。內參為B—actin。應用圖像灰度掃描系①基金項目：佳木斯大學校級重
