雞產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離鑒定及藥敏試驗-論文.pdf

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1、動物醫(yī)學(xué)進展。2013，34(12)：228—232ProgressinVeterinaryMedicine雞產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離鑒定及藥敏試驗陳海寧，廖申權(quán)，戚南山，李娟，呂敏娜，孫銘飛，吳彩艷卜(1．廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物衛(wèi)生研究所，廣東廣州510640；2．河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，河南鄭州450002)摘要：為確定廣東韶關(guān)地區(qū)兩個養(yǎng)殖密度較大雞場病死雞的患病病原，根據(jù)臨床癥狀、剖檢病變疑似壞死性腸炎，每場各分離到1株細菌，通過對細菌分離株進行形態(tài)培養(yǎng)、生化鑒定、牛乳洶涌發(fā)酵試驗、PCR種特異性和毒素型鑒定等試驗

2、，鑒定2個分離株均為A型產(chǎn)氣莢膜梭菌。對分離株進行藥敏試驗，測定了臨床上常用的抗茵藥物添加劑對兩株產(chǎn)氣莢膜梭茵的最小抑菌濃度(MIC)，結(jié)果顯示恩拉霉素和維吉尼亞霉素對兩分離株具有良好的抑菌效果，黃霉素、吉他霉素、硫酸黏桿菌素對個別菌株具有抑茵作用，而那西肽則無明顯抑茵作用。研究結(jié)果可為雞壞死性腸炎的臨床防控提供參考。關(guān)鍵詞：產(chǎn)氣莢膜梭菌；分離鑒定；最小抑菌濃度中圖分類號：$852．616．3文獻標識碼：B文章編號：1007—5038(2013)12-0228-05雞壞死性腸炎(Necroticenteritis，

3、NE)又稱腸毒臥，不愿站立，食欲減退消瘦，嚴重下痢，糞便混有血血癥、爛腸癥，由產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridiumpe砌一液涪0檢病雞小腸腸道腫脹充血，腸內(nèi)充滿泡沫狀液gens)引起的一種以侵害雞只腸道，引起腸道出血、潰體，腸黏膜布滿出血點。肝臟和脾臟腫大出血；腸道瘍、壞死為主要特征的一種疾病]。產(chǎn)氣莢膜梭菌是糞便涂片鏡檢顯示，糞便中僅存在極少數(shù)卵囊，尚不一種廣泛分布于自然界和動物腸道中的條件性致病足以引起球蟲病。根據(jù)流行情況、臨床癥狀和剖檢病菌，該病經(jīng)常與小腸球蟲病并發(fā)或繼發(fā)。目前該病已變，疑雛雞患壞死性腸炎，為

4、進一步確診，需進行病原廣泛分布于世界各地，呈全球流行態(tài)勢，嚴重危害各分離培養(yǎng)及鑒定試驗。國養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展。產(chǎn)氣莢膜梭菌能產(chǎn)生多種外毒素1．1_2試劑及培養(yǎng)基鮮血瓊脂培養(yǎng)基、液體硫乙和酶類，根據(jù)產(chǎn)生4種主要致死性毒素及其抗毒素的醇酸鹽培養(yǎng)基(FT)、TSC(胰蛋白胨一亞硫酸鐵一環(huán)絲氨中和試驗，可將此菌分為A、B、C、D、E5個型r2]。目酸)培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基按細菌學(xué)常規(guī)方法配制；微前國內(nèi)流行的感染禽類的產(chǎn)氣莢膜梭菌主要是A量生化發(fā)酵管購自廣東環(huán)凱生物科技有限公司；脫脂型口]。近年來隨著抗壞死性腸炎藥物的廣泛使用，使

5、奶粉購自廣州鼎國生物公司；PremixTaq、DNA雞產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)生了嚴重的耐藥性，為臨床治療時MarkerDL2000，TaKaRa公司產(chǎn)品；PCR定型引物選擇用藥帶來了巨大的困難]。由廣州英俊生物技術(shù)工程公司合成；A型產(chǎn)氣莢膜梭本研究從廣東韶關(guān)某兩個大型養(yǎng)雞場疑似患壞菌標準株購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；各種抗菌藥物均死性腸炎的肉雞中，分離到2株產(chǎn)氣莢膜梭菌，對其為國內(nèi)通過GMP驗收的正規(guī)獸藥企業(yè)生產(chǎn)。進行了生化和分子生物學(xué)鑒定，并對其抗藥性進行了1．1．3產(chǎn)氣莢膜梭茵毒素型鑒定引物多重PCR體詳細研究，為雞壞死性

6、腸炎的臨床防控提供一定的參系引物參照文獻E5]合成，預(yù)期片段分別為325、196、考。665、446bp。1材料與方法1．2方法1．1材料1．2．1病原的分離與鑒定1．1．1發(fā)病情況廣東韶關(guān)地區(qū)3000只雞規(guī)模的1．2．1．1病原的分離將分離的小腸用無菌剪刀剪2個養(yǎng)殖場的20日齡雛雞發(fā)病，3日齡時已經(jīng)免疫球一小段，以滅菌FT培養(yǎng)基清洗幾次，去除糞便及血蟲活卵囊疫苗，當?shù)貧鉁剌^高且潮濕，許多雛雞發(fā)病，液，用滅菌環(huán)從小腸內(nèi)容物中勾取一環(huán)分別劃線接種病死率約5左右；病雞表現(xiàn)精神不振，羽毛蓬亂，喜鮮血瓊脂平板、麥康凱平板與

7、TSC平板，37℃過夜厭收稿日期：2013—04—09基金項目：廣東省農(nóng)業(yè)攻關(guān)項目(2012A020100001)作者簡介：陳海寧(1989一)，女，河南駐馬店人，碩士研究生，主要從事雞球蟲生化代謝研究。廖申權(quán)(1981一)，女，重慶榮昌人，助理研究員，博士，主要從事雞球蟲生化代謝研究?！魍蓉暙I作者。*通訊作者陳海寧等：雞產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離鑒定及藥敏試驗231從結(jié)果可以看出恩拉霉素和維吉尼亞霉素對2個菌的抗藥性問題愈加突出。株CP具有良好的抑菌效果，但MIC尚有差別。如對本次分離的兩株產(chǎn)氣莢膜梭菌進行MIC的恩拉

8、霉素對SG1的MIC為16肚g／mL，而對SG2的測定顯示，恩拉霉素和維吉尼亞霉素對2個菌株具MIC為32／~g／mL，維吉尼亞霉素對兩株MIC均為有良好的抑菌效果，黃霉素、吉他霉素、硫酸黏桿菌64Fg／mL；黃霉素、吉他霉素、硫酸黏桿菌素對部分素對部分菌株具有抑制作用，而那西肽則無明顯抑細菌具有抑制作用，黃霉素對SG1的MIC為128制作用。由此看出，養(yǎng)殖