化學(xué)發(fā)光介紹.ppt

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1、化學(xué)發(fā)光介紹二零零九年元月化學(xué)發(fā)光免疫分析方法簡介化學(xué)發(fā)光免疫分析（ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA）是近十年來在世界范圍內(nèi)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析。它具有高靈敏度、檢測范圍寬、操作簡便快速、標記物穩(wěn)定性好、無污染、儀器簡單經(jīng)濟等優(yōu)點。它是放射性免疫分析與普通酶免疫分析的取代者，是免疫分析重要的發(fā)展方向。CLIA發(fā)展迅猛，已占各種免疫分析的首位，是目前放射免疫分析和酶聯(lián)免疫分析最佳的取代者?；瘜W(xué)發(fā)光免疫測定是目前世界公認先進的標記免疫測定技術(shù)，化學(xué)發(fā)光免疫分析

2、技術(shù)具有高度的準確性和特異性，成為檢驗方法中最為重要的技術(shù)之一?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)作為疾病診斷的主要手段已被廣泛用于機體免疫功能、傳染性疾病、內(nèi)分泌功能、腫瘤標志物、性激素、甲狀腺功能等方面的體外診斷實驗中?；瘜W(xué)發(fā)光是一種特異的化學(xué)反應(yīng)，有機分子吸收化學(xué)能后發(fā)生能級躍遷，產(chǎn)生一種高能級的電子激發(fā)態(tài)不穩(wěn)定的中間體，當(dāng)其返回到基態(tài)而發(fā)出光子，即為化學(xué)發(fā)光。將化學(xué)發(fā)光與抗原抗體相結(jié)合而形成的免疫分析技術(shù)，即為化學(xué)發(fā)光免疫分析?；瘜W(xué)發(fā)光的發(fā)光類型通常分為閃光型（flashtype）和輝光型（glowtyp

3、e）兩種。閃光型發(fā)光時間很短，只有零點幾秒到幾秒。輝光型又稱持續(xù)型，發(fā)光時間從幾分鐘到幾十分鐘，或幾小時至更久。閃光型的樣品必須立即測量，必須配以全自動化的加樣及測量儀。測量輝光型的樣品可以使用通用型儀器，也可以配全自動化儀器。北京泰格科信的化學(xué)發(fā)光免疫分析診斷試劑發(fā)光類型為輝光型?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析的優(yōu)勢靈敏度高靈敏度高是化學(xué)發(fā)光免疫分析關(guān)鍵的優(yōu)越性，其靈敏度可達10-22mol/L（RIA為10-12mol/L）?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析能夠檢出放射免疫分析和酶聯(lián)免疫分析等方法無法檢出的物質(zhì)，對疾病的早期

4、診斷具有十分重要的意義。寬的線性動力學(xué)范圍發(fā)光強度在4～6個量級之間與測定物質(zhì)濃度間呈線性關(guān)系。這與顯色的酶免疫分析吸光度（OD值）為2.0的范圍相比，優(yōu)勢明顯。雖然RIA也有較寬的線性動力學(xué)范圍，但放射性限制了其應(yīng)用。光信號持續(xù)時間長輝光型的CLIA產(chǎn)生的光信號持續(xù)時間可達數(shù)小時甚至一天。簡化了實驗操作及測量。分析方法簡便快速絕大多數(shù)分析測定均為僅需加入一種試劑（或復(fù)合試劑）的一步模式。結(jié)果穩(wěn)定、誤差小樣品系直接自己發(fā)光，不需要任何光源照射，免除了各種可能因素（光源穩(wěn)定性、光散射、光波選擇器等）給

5、分析帶來的影響，使分析結(jié)果靈敏穩(wěn)定可靠。安全性好及使用期長免除了使用放射性物質(zhì)。到目前為止，還未發(fā)現(xiàn)其危害性；試劑穩(wěn)定，保存期可達一年。目前化學(xué)發(fā)光開展的項目1、乙肝兩對半（表面抗原、表面抗體、E抗原、E抗體、核心抗體）6、肝纖維化檢測（HA,LN,PCIII,CIV,FN）2、腫瘤標志物（AFP,CEA,PSA,FPSA,FER,CA199,CA125,CA153,B-2MG…）7、不育不孕類（AOA,AEA,ASA,ATB.ACA.ZB,HCG）3、性激素系列（LH,FSH,TSH,E2,PRO

6、,PRL,TES,HCG,B-HCG…）8、優(yōu)生優(yōu)育類（TOX,CMV,HSVI,HSVII,RUB）4、甲狀腺功能（T3,T4,FT3,FT4,TSH,TM,TG,TPO…）9、其他類（ALB,一些藥物測試等）5、糖尿病系列（C肽，INS,INS-AB,GAD,PINS,ICA…）10、不斷發(fā)展中的其他臨床檢測項目。。。為什么要開展乙肝“兩對半”定量檢測乙型病毒性肝炎是世界性的傳染病，嚴重地威脅著人類的健康。我國是乙型病毒性肝炎高發(fā)病國家。據(jù)統(tǒng)計全世界無癥狀攜帶者（HBsAg攜帶者）超過2.8億，

7、我國占1億以上，且多數(shù)無癥狀。所以乙肝的早期診斷對控制傳染源、降低發(fā)病率及疾病的治療均具有很重要的意義。酶標（ELISA）檢測始于20世紀80年代中期，它對乙肝“兩對半”定性測定在疾病的診斷，病情監(jiān)測，療效觀察起到了一定的作用，但酶標檢測HbsAg靈敏度較低，不能真正意義上定量測定血清中HbsAg含量。隨著臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展，定性檢測已經(jīng)遠遠不能滿足臨床及患者的要求。化學(xué)發(fā)光免疫分析定量測定乙肝“兩對半”大大彌補了酶標定性測定及靈敏度低的不足。一、化學(xué)發(fā)光極大地提高了檢測靈敏度HBsAg是HBV感染的特

8、異標志，HBsAg的出現(xiàn)就可作為乙肝的早期診斷，絕大多數(shù)HBV感染者外周血可出現(xiàn)HBsAg?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析檢測HBsAg靈敏度可達0.2ng/ml，而酶標（EIASA）檢測的靈敏度為2ng/ml，放射免疫（RIA）靈敏度為1ng/ml，化學(xué)發(fā)光免疫分析極大地提高檢測的靈敏度。因此，在急性乙肝早期化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測能及早檢出HBsAg，縮短窗口期的時間，而酶標檢測在乙肝早期往往HBsAg呈陰性；其次，可發(fā)現(xiàn)低濃度HBsAg攜帶者；在部分慢性乙肝患者中，由于機體缺乏對