緩解體力疲勞功能評價方法.doc

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1、緩解體力疲勞功能試驗(yàn)項目、試驗(yàn)原則及結(jié)果判定1.實(shí)驗(yàn)項目1.1動物實(shí)驗(yàn)1.1.1動物體重1.1.2負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)1.1.3力竭實(shí)驗(yàn)1.2人體試食試驗(yàn)1.2.1臨床癥狀與體征1.2.2跑臺試驗(yàn)2試驗(yàn)原則2.1動物實(shí)驗(yàn)所列指標(biāo)均為必做項目，動物負(fù)重游泳和力竭實(shí)驗(yàn)前，對實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行運(yùn)動能力篩選。2.2實(shí)驗(yàn)前必須對同批受試樣品進(jìn)行違禁藥物的檢測。2.3運(yùn)動實(shí)驗(yàn)與生化指標(biāo)檢測相結(jié)合。2.4在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時，應(yīng)對受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。2.5停止給予受試物一天后進(jìn)行效果觀察。3結(jié)果判定3.1動物實(shí)驗(yàn)：負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性，力竭實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性（特指無顯著

2、不利影響），可判定該受試樣品緩解體力疲勞功能的動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性。3.2人體試食試驗(yàn)：（1）試食前后，受試組自身對照，肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶無不利的顯著性改變；（2）跑臺試驗(yàn)：試食組自身對照，試食后運(yùn)動時間與試食前相比顯著性增加，首次試食后運(yùn)動時間與試食前相比無顯著性差異。滿足（1）和（2）可判定該受試樣品具有緩解體力疲勞的功能。緩解體力疲勞功能評價方法1.動物實(shí)驗(yàn)1.1原理在一定時間內(nèi)給予一定量的受試樣品，通過持續(xù)服用，調(diào)整特定人群機(jī)體狀態(tài)，使其擁有更好的調(diào)節(jié)功能，該功能包括應(yīng)對潛在需求、使機(jī)體處于良好狀態(tài)，具有更長時間作業(yè)能力或在相同作業(yè)

3、時間內(nèi)不出現(xiàn)更重的疲勞表現(xiàn)。1.2負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)1.2.1儀器與器材游泳箱（大小約80cm×50cm×60cm），電子天平、鉛皮。1.2.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.2.1實(shí)驗(yàn)動物推薦使用雄性小鼠，6周齡，體重20-24g。1.2.2.2劑量分組及受試樣品給予時間實(shí)驗(yàn)設(shè)三個劑量組和一個陰性對照組，一個空白對照組，一個單次中劑量受試組。其中以人體推薦量的10倍為其中的一個劑量組，另設(shè)二個劑量組，必要時設(shè)陽性對照組。陰性對照組灌胃給予安慰劑。受試樣品給予時間30天，必要時可延長至45天。1.2.2.3實(shí)驗(yàn)步驟末次給受試樣品24小時后，將尾根部負(fù)荷6%體重鉛皮的小鼠置于游

4、泳箱中游泳。水深不少于40cm，水溫30℃±2.0℃，記錄小鼠自游泳開始至力竭時間，即小鼠負(fù)重游泳時間。力竭判斷標(biāo)準(zhǔn)為：小鼠沉入水中超過10秒，且放在平面上無法完成翻正反射。1.2.3數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定游泳時間為計量資料，采用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計算F值，F(xiàn)值

5、，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計。（1）受試樣品組負(fù)重游泳時間明顯長于陰性對照組和空白對照組，且差異有顯著性；（2）單次中劑量組與陰性對照組相比，負(fù)重游泳時間無顯著差異。同時滿足（1）和（2）時，可判定該實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。1.3力竭實(shí)驗(yàn)1.3.1儀器與器材全自動生化儀，游泳箱，電子天平、鉛皮。1.3.2實(shí)驗(yàn)方法1.3.2.1實(shí)驗(yàn)動物雄性SD大鼠，體重160-200g。1.3.2.2劑量設(shè)計和分組大鼠以人體推薦量的5倍為基本劑量。其余同1.2.2.2。1.3.2.3實(shí)驗(yàn)步驟末次給受試樣品24小時后，采用尾部負(fù)重3%體重鉛皮的大鼠置于游泳箱中游泳。水深不少于50cm，水溫

6、31℃±1.0℃，當(dāng)大鼠游至連續(xù)3次沒入水底，每次超過10秒，視為力竭。記錄大鼠自游泳開始至力竭時間，大鼠腹主動脈采血全血，置4℃冰箱約3h，血凝固后2000rpm離心15min，取血清備用，測定尿素氮、肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶活性。1.3.3數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定血液生化數(shù)據(jù)為計量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計算F值，F(xiàn)值

7、差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計。（1）受試樣品組與陰性對照組和空白對照組相比，血清尿素氮、肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶活性應(yīng)無顯著性差異；（2）單次中劑量組與陰性對照組相比，血清尿素氮、肌酐、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶活性應(yīng)無顯著性差異；同時滿足（1）和（2）時，可判定該實(shí)驗(yàn)結(jié)果陰性（特指無顯著不利影響）。1.4注意事項1.4.1每一游泳箱一次放入動物不宜太多，每只小鼠占用的水面積大多在300平方厘米以上，每平方米水面同時不超過6只大鼠游泳，否則互相擠靠，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。1.4.2水

8、溫對小鼠的游泳時間有明顯的影響，因此要求各組水溫控制一致，每一批實(shí)驗(yàn)動物下水之前