樹舌胞外多糖分離純化實驗方案1

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1、透析一、透析袋的前處理1．把透析袋剪成適當(dāng)長度（20cm）的小段，將透析袋煮沸10分鐘。2．用蒸餾水徹底清洗透析袋。（以后的每步操作必須戴一次性手套）3．冷卻后，存放于4℃，必須確保透析袋始終浸沒在溶液內(nèi)。4．用前在透析袋內(nèi)裝滿水然后排出，將之清洗干凈。二、透析的步驟將多糖溶液濃縮（用旋蒸儀濃縮）后，高速離心8000rpm，4℃下10分鐘，裝入透析袋中，排出空氣，用棉線扎口。懸掛在清水容器中，于4℃用蒸餾水透析48h。取出，凍干保存。離子交換纖維素DEAE－52柱層析1、纖維素預(yù)處理：蒸餾水浸泡3～5h，抽濾，0.5mol·L－1NaOH溶液浸泡3～5h，抽濾，NaOH溶液洗

2、滌2～4次，蒸餾水清洗至中性，0.5mol·L－1HCl溶液浸泡3～5h，抽濾，HCl溶液洗滌2～4次，蒸餾水洗至中性，0.5mol·L－1NaOH溶液浸泡，抽濾，NaOH溶液洗滌2～4次，蒸餾水清洗至中性，溶解待用。2、裝柱：將處理好的纖維素溶于洗脫液中，浸泡3h后抽濾。再次溶解，拌勻后用玻璃棒貼層析柱內(nèi)壁引流（避免出現(xiàn)氣泡）裝柱，用0.02mol磷酸鹽緩沖液穩(wěn)定12h左右。3、上樣：透析后的多糖溶液上纖維素DE-52層析柱，用0.2mol/LNaCl和0.5mol/LNaCl溶液梯度洗脫，恒流泵控制流速約為1.4rpm（每分鐘20滴），每管5mL收集。（收集后測試試管內(nèi)是

3、否有多糖，苯酚-硫酸法，2滴溶液+1滴6%苯酚+5滴濃硫酸，于顯色皿觀察，收集顯黃褐色的試管溶液）苯酚-硫酸法：吸取0.2ml的樣品液，以蒸餾補至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻室溫放置20分鐘以后于490nm測光密度。樣品處理：將收集的樣品濃縮到約50ml后，高速離心8000rpm，4℃下10分鐘，再次透析（方法同上），收集樣品于100ml燒杯，置于真空干燥箱干燥24~48h，取出樣品，置于干燥器中待用試劑的配制1、0.5mol/LNaOH0.5mol/LHCl2、0.2mol/L、0.5mol/LNaCl（58.44×0.2=11.688

4、g/L58.44×0.5=29.22g/L）由相對應(yīng)質(zhì)量NaCl溶于0.02mol磷酸鹽緩沖液配的3、6%苯酚6g苯酚溶于100ml蒸餾水4、0.2mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.2）磷酸氫二鈉0.2mol/LNa2HPO472ml+磷酸二氫鈉0.2mol/LNaH2PO428ml使用時稀釋10倍。M（Na2HPO4）=0.2*184*0.072=2.9664gM(NaH2PO4)=0.2*184*0028=1.0304g