DB32∕T 2093-2012 葡萄苗木組培繁育技術規(guī)程.pdf

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1、ICS65.020.20B31備案號：33998-2012DB32江蘇省地方標準DB32/T2093-2012葡萄苗木組培繁育技術規(guī)程Technicalregulationsforgrapemicropropagation2012-05-08發(fā)布2012-08-08實施江蘇省質量技術監(jiān)督局發(fā)布DB32/T2093-2012前言本規(guī)程按照GB/T1.1-2009《標準化工作導則第1部分：標準的結構和編寫》的規(guī)定編制。本規(guī)程由南京農業(yè)大學園藝學院提出。本規(guī)程起草單位：南京農業(yè)大學園藝學院、江蘇省果樹品種改良與種苗繁育工程中心。本規(guī)程主要起草人：房經貴、郭磊、韓鍵、上官凌飛。DB

2、32/T2093-2012葡萄苗木組培繁育技術規(guī)程1范圍本標準規(guī)定了葡萄苗木組培繁育的術語和定義、儀器設備、試劑及培養(yǎng)基的準備、組培苗生產流程、培養(yǎng)容器和接種器械的清洗、消毒滅菌操作、培養(yǎng)室操作、組培苗和組培穴盤苗質量要求。本標準適用于葡萄苗木組培繁育。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的應用而成為本標準的條款。在標準出版時，所示版本均為有效。所有標準都會被修訂，使用本標準的各方應探討使用下列標準最新版本的可能性。NY/T393—2000綠色食品農藥使用準則NY/T469—2001葡萄苗木DB32/T1295—2008高山杜鵑組織培養(yǎng)技術規(guī)程3術語和定義下列術語和定

3、義適用于本標準。3.1組培苗plantlet利用植物器官等作為外植體，采用植物組織培養(yǎng)技術生產的種苗。3.2外植體explant用于離體培養(yǎng)的初始材料稱為外植體。3.3組培穴盤苗plugplant移栽在穴盤中培育的組培生根苗。3.4初代培養(yǎng)primaryculture又稱誘導培養(yǎng)，指組織培養(yǎng)過程中，將直接從母株采取的最初的外植體在無菌條件下進行培養(yǎng)以期產生不定芽、愈傷組織，從而建立無菌培養(yǎng)物的培養(yǎng)階段。3.5繼代培養(yǎng)subculture將培養(yǎng)物轉移到新的培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)的過程。4儀器設備、試劑及培養(yǎng)基的準備1DB32/T2093-20124.1儀器設備主要有高壓滅菌鍋、超凈

4、工作臺、藥品柜、冰箱、電爐、電子天平、臺秤、攪拌器、pH計、搖床以及燒杯、培養(yǎng)皿、三角瓶、量筒、容量瓶、磨扣試劑瓶、滴管、手術刀、鑷子、剪刀、接種針、酒精燈等設備。4.2試劑試劑的選擇應符合附錄A所要求的試劑級別。4.3基本培養(yǎng)基配制制作培養(yǎng)基前需先配制基本培養(yǎng)基母液，MS基本培養(yǎng)基母液配制時，稱取MS培養(yǎng)基干粉41.74g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，116℃高壓滅菌30分鐘備用。4.4植物生長物質的母液配制植物生長物質的母液配制濃度0.1mg/mL～1.0mg/mL，植物生長物質的母液配制方法參見附錄B。4.5培養(yǎng)基制作初代培養(yǎng)基的組成主要為1/2MS+0.03～1

5、.0mg/LNAA+1.0mg/L6-BA。可根據不同品種、培養(yǎng)目的及途徑，添加不同種類激素及有機添加物；增殖培養(yǎng)基及生根培養(yǎng)基同樣選用MS培養(yǎng)基，其主要組成為1/2MS+0.1mg/LIAA?？筛鶕煌贩N、培養(yǎng)目的及途徑，添加適量的激素及有機添加物。5葡萄組培苗生產流程5.1材料選擇選擇品種純正、農藝性狀優(yōu)良、生長健壯、無病蟲害的植株作為母株，取當年新萌發(fā)尚未木質化的新梢，剪去葉片后，剪截成帶3～4個芽的莖段作為外植體。5.2外植體滅菌外植體用自來水沖洗3～4次，用70%的酒精消毒30s后用無菌水沖洗一次，根據枝條的成熟程度，在0.1%升汞溶液中浸泡5～7min，再用無

6、菌水沖洗4～6次。5.3初代培養(yǎng)5.3.1操作前消毒在接種之前，工作人員的手部，包括手腕，都要用75%的酒精仔細擦拭一遍。接種器械需滅菌后晾放2min以上備用(下同)。5.3.2接種在無菌條件下，把滅菌處理后的莖段剪成單芽莖段，接入初代培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。外植體在瓶內要排放均勻、整齊，一般外植體初代培養(yǎng)20d～40d后可誘導出幼芽。5.3.3封口及時蓋上瓶蓋，其松緊度以用手轉不動為準。5.3.4記錄接種人員將品種代號、培養(yǎng)基類型、個人編號以及接種日期認真標示到瓶上，字跡工整。5.3.5培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度(25±2)℃，光照強度1500lx～2000lx，光照時間每天12h～16

7、h(下同)。2DB32/T2093-20125.4增殖培養(yǎng)初代培養(yǎng)誘導形成的幼芽長至3～4片葉時，轉接到增殖培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。特別注意的是在增殖培養(yǎng)過程中，隨著增殖次數的增加，激素濃度也必須隨之下降，否則很容易使培養(yǎng)物發(fā)生畸形，最后導致種苗發(fā)生變異。一般培養(yǎng)周期為30d左右。每隔30d繼代一次。5.5生根培養(yǎng)從繼代培養(yǎng)的幼苗中選取生長健壯、葉色正常、葉片舒展的無根苗，切成帶有腋芽和葉片的莖段接入生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基成分與增值培養(yǎng)培養(yǎng)基相同。培養(yǎng)20d～30d后幼苗基部長出數根新根。5.6煉苗將試管苗轉移至溫室，自然