實驗6：Cary eclipse熒光分光光度計的使用和熒光粉的發(fā)光.doc

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1、實驗6：Caryeclipse熒光分光光度計的使用和熒光粉的發(fā)光性能研究實驗目的1.了解熒光分光光度計的基本構(gòu)造。2.掌握熒光分光光度計的使用方法。實驗原理熒光、磷光分析法原理：物質(zhì)被某一波長的光照射后，會發(fā)射出比照射波長稍長的光，這種光稱為熒光，它的過程是當物質(zhì)的分子處于基態(tài)時，吸收光后可躍遷到激發(fā)態(tài)，各激發(fā)態(tài)分子相互撞擊而以無輻射能量損失的形式回到第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動能級，這一振動能級的分子在返回基態(tài)時，所發(fā)射的光稱為熒光，但當它轉(zhuǎn)入亞穩(wěn)的第一激發(fā)態(tài)三重態(tài)的最低振動能級，停留一段時間，返回至基態(tài)時所發(fā)出的光稱為磷光。儀器原理：兩套光路1.激發(fā)光譜（吸收）?（λ）ex，照射

2、樣品，樣品吸收，產(chǎn)生激發(fā)2.發(fā)射光譜?（λ）em，激發(fā)態(tài)樣品退激，產(chǎn)生發(fā)射光3儀器與試劑CaryEclipse熒光分光光度計(加固體樣品附件)、鑷子、洗耳球。4實驗步驟1.進入掃描應用程序打開儀器電源。開計算機，顯示器，打印機。雙擊桌面CaryEclipse圖標，計算機進入CaryEclipse操作系統(tǒng)。用鼠標雙擊按鈕，進入工作界面。2.設置數(shù)據(jù)采集參數(shù)單擊設置按鈕,出設置對話框。（1）在Cary欄下設置：①在采樣模式中選熒光。②進行掃描參數(shù)設置：若掃描激發(fā)光譜，則點擊激發(fā)，則在對話框中填上最佳發(fā)射波長，及掃描范圍，狹縫等。若要掃描發(fā)射光譜，則點擊發(fā)射。在對話框中填上，x-模式：

3、選nm。最佳激發(fā)波長，及掃描的波長范圍，狹縫等。（2）在Cary欄下設置：PMT檢測器項中:根據(jù)需要選取高壓、中壓或低壓。點擊OK，完成設置，3.儀器調(diào)零：在樣品室中放入空白樣品，按調(diào)零按鈕。（注意：該調(diào)零僅僅對當前激發(fā)和平均時間處的一點進行讀數(shù)，以后的數(shù)據(jù)均減除該數(shù)據(jù)。它并非進行基線掃描扣除空白，需要整體空白扣除掃描時，將空白也當成樣品來掃一條完整的譜線，然后利用軟件的計算器功能，進行譜線相減。）4.進行樣品掃描：放入樣品，按開始按鈕，在所出對話框中，輸入樣品名稱后，按OK，儀器便開始對樣品進行掃描測量。5.存儲掃描譜圖：在文件菜單à另存為，輸入文件名，將數(shù)據(jù)保存為FBSW格式

4、文件，打印譜圖。7.將固體樣品附件取出并清潔干凈。退出軟件，關機。5實驗結(jié)果和討論用468nm藍光激發(fā)熒光粉，觀察發(fā)光顏色并得到其在480～700nm的發(fā)射光譜，標出最強發(fā)射峰位置。不同組之間譜圖進行比較。6思考題1.熒光分光光度計操作有哪些注意事項？2.熒光和磷光的區(qū)別？