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1、層析工藝樹脂填料TOYOPEARL和TSK-GEL5PW的裝填指南目錄一、層析柱的裝填11.裝填前的準備工作1a.裝填的一般考慮1b.小顆粒的去除1c.緩沖液平衡2d.勻漿準備22.裝填步驟3a.恒流速/半恒壓裝填法4b.可供選擇的裝填方法53.平衡與柱效評價6二、層析柱的操作71.柱層析7a.分子尺寸排阻層析（SEC）7b.離子交換層析（IEC）8c.疏水反應層析（HIC）8d.親和層析（AFC）82.填料的清洗93.填料的保存104.滅菌/熱原的去除/防腐劑的清除/柱篩板10關于TOYOPEARL和T
2、SK-GEL5PW的簡介填料，將其攪拌成懸浮液（請不要使用磁力攪拌器，這會磨碎樹脂填料并產(chǎn)生小顆粒）。一旦成為懸浮液TOYOPEARL和TSK-GEL5PW大孔樹脂型填料應用后，立刻將需要量的懸浮液（大概4體積的懸浮液=3于生物分子層析工藝，非常適合實驗室和工業(yè)級大規(guī)體積的樹脂填料）倒入某個容器內(nèi)，容器的體積應不模生產(chǎn)中球狀蛋白、多肽、核酸以及其他生化衍生物小于需要裝柱填料體積的4倍。加入蒸餾水或者緩沖的分離純化。這種樹脂型填料為改性的聚甲基丙烯酸液至4倍填料體積，并一直保持攪拌。酯，由于醚及羥基的存在使
3、其具有親水性的表面，并且具有了更好的耐壓性能、流動特性及pH穩(wěn)定性。舉例：5L樹脂填料（裝柱需要量）=7~8L懸浮液一、層析柱的裝填（65~70%勻漿濃度）因此，您至少需要準備20L的容器。（2）靜置勻漿液靜置時間取決于容器的直徑、勻漿溶劑和填料的粒徑大小。TOYOPEARL和TSK-GEL5PW填料用水勻漿時，平均靜置時間如下。TOYOPEARLCoarseC級：100μm15-30分鐘MediumM級：65μm30-45分鐘FineF級：45μm45-60分鐘SuperfineS級：35μm60-90
4、分鐘圖1.裝填所需要的裝置TSK-GEL5PW30μm90-120分鐘1.裝填前的準備工作20μm>120分鐘a.TOYOPEARL和TSK-GEL5PW裝填的一般考慮（3）一旦填料靜置完成后，小心倒出表面的懸浮液。TOYOPEARL的裝填壓力最好為0.5~3bar（7~45psi）；TSK-GEL5PW的裝填壓力最好為3~10bar（45~140psi）。盡管TOYOPEARL和TSK-GEL5PW填料也可以通過重力沉降法進行裝填，但這并不值得提倡。TOYOPEARL的裝填壓力不應過高（<5bar），T
5、SK-GEL5PW的裝填壓力不應超過20bar。成功裝填TOYOPEARL和TSK-GEL5PW所需要的圖2.倒出表面的懸浮液圖3.再次懸浮設備有（參照圖1）：泵（HPLC或蠕動泵）、壓力表、水平儀、玻璃/聚丙烯酸/PEEK或不銹鋼層析柱、儲槽（4）加入3倍填料體積的蒸餾水或者緩沖液，輕輕在（可選）等。填料表面攪拌使其重新懸浮。請不要使用磁力攪拌器，這會磨碎樹脂填料并產(chǎn)生小顆粒。b.小顆粒的去除（我們建議最好去除小顆粒）在勻漿后的膠體中所存在的小顆粒會阻塞篩板或燒結（5）重復步驟（3）和步驟（4）至少3次
6、以上，直到板，最終會導致整個柱子的壓降增大。通過下列過程懸浮液不再渾濁。可將勻漿后膠體中所存在的小顆粒去除。在去除小顆粒時的最后一次步驟中可加入裝填緩沖液（參見c.（1）通過一根攪拌棒或槳激烈攪拌包裝容器內(nèi)的樹脂緩沖液平衡）進行填料的平衡，如此可節(jié)約時間。-1-c.緩沖液平衡液，并將其倒入一個預先準備的量筒。（參照圖4）對于所有的TOYOPEARL和TSK-GEL樹脂填料，我（2）將漿液靜置過夜（>12小時），以便獲得最佳裝們建議裝填時使用高離子強度的緩沖溶液。盡管這些填效果。填料可以用水裝填，但相對于用
7、同樣裝填方法而使用鹽溶液作為緩沖液的層析柱而言，塔板數(shù)較低并且不對稱性因子較高。對于疏水層析柱用水裝填時，相對于高離子強度的緩沖溶液，更容易在柱內(nèi)壁形成溝槽。這些溝槽的存在非但不是必須的，更會對柱子的性能造成不良影響。當選擇裝填緩沖液時，最好根據(jù)經(jīng)驗來選擇，因為根據(jù)您特定的應用而選擇最優(yōu)化的填裝緩沖液是最為合適的。總的來說，分離純化步驟（包括清洗和消毒步驟）中將使用到的最高離子強度的流動相，是裝填緩沖液的首選。一些常見的裝填緩沖液請參見表1。表1.典型的裝填緩沖溶液分子尺寸排阻（SEC）Toyopearl
8、HW-40,HW-50,0.1MNa2SO4,NaNO3或HW-55,HW-65,HW-75NaCl溶于50mM磷酸鹽或Tris緩沖液圖4.靜置中的填料漿液離子交換（IEC）ToyopearlDEAE,QAE,SuperQ,1MNaCl溶于50mM磷酸（3）對于TOYOPEARL樹脂填料，確定靜置膠體積CM,SP,MegCapSP-550鹽,Tris或醋酸鹽緩沖液后，加入或去除裝柱緩沖液，以便將勻漿液濃度調節(jié)至30~50%；對
