大腸菌群測(cè)定.ppt

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1、大腸菌群測(cè)定小組成員：金思利杜夢(mèng)嬌葉岳成鄭文龍依據(jù)GB4789．3-2010，討論若進(jìn)行食品中大腸菌群的測(cè)定，需準(zhǔn)備好哪些材料，且如何進(jìn)行測(cè)定？討論的問題大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，這些細(xì)菌在生化及血清學(xué)方面并非完全一致，一般認(rèn)為該菌群細(xì)菌可包括大腸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。大腸菌群是作為糞便污染指標(biāo)菌提出來的，主要是以該菌群的檢出情況來表示食品中有否糞便污染。大腸菌群數(shù)的高低，表明了糞便污染的程度，也反映了對(duì)人體健康危害性的大小。糞便是人類腸道排泄物，其中有健康人糞便，也有腸道患者或帶菌者的糞便，所

2、以糞便內(nèi)除一般正常細(xì)菌外，同時(shí)也會(huì)有一些腸道致病菌存在（如沙門氏菌、志賀氏菌等），因而食品中有糞便污染，則可以推測(cè)該食品中存在著腸道致病菌污染的可能性，潛伏著食物中毒和流行病的威脅，必須看作對(duì)人體健康具有潛在的危險(xiǎn)性。大腸菌群的概述食品中查出大腸菌群超標(biāo)由于大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，即需氧及兼性厭氧、在37℃能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。因此大腸菌群的檢測(cè)一般都是按照它的定義進(jìn)行。中國(guó)采用的進(jìn)出口食品大腸菌群檢測(cè)方法主要有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和原國(guó)家商檢局制定的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)方法在檢測(cè)程序上略有不同。國(guó)家

3、標(biāo)準(zhǔn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)采用三步法，即乳糖發(fā)酵試驗(yàn)、分離培養(yǎng)和證實(shí)試驗(yàn)。乳糖發(fā)酵試驗(yàn)：樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管。36±1℃培養(yǎng)48±2h，觀察是否產(chǎn)氣。分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣發(fā)酵管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，36±1℃培養(yǎng)18-24h，觀察菌落形態(tài)。證實(shí)試驗(yàn)：挑取平板上的可疑菌落，進(jìn)行革蘭氏染色觀察。同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管36±1℃培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。報(bào)告：根據(jù)證實(shí)為大腸桿菌陽(yáng)性的管數(shù)，查MPN最大可能數(shù)表，報(bào)告每100mL（g）大腸菌群的MPN值。具體操作參見GB4789.3—94《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食

4、品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群測(cè)定》檢驗(yàn)方法原國(guó)家商檢局制定的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)原國(guó)家商檢局制定的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)采用美國(guó)FDA的標(biāo)準(zhǔn)方法，用于對(duì)出口食品中的大腸桿菌進(jìn)行檢測(cè)。推測(cè)試驗(yàn)：樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管LST肉湯。36±1℃培養(yǎng)48±2h，觀察是否產(chǎn)氣。證實(shí)試驗(yàn)：將產(chǎn)氣管培養(yǎng)物接種煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯管中，36±1℃培養(yǎng)48±2h，觀察是否產(chǎn)氣。以BGLB產(chǎn)氣為陽(yáng)性。查MPN表，報(bào)告1mL(g)樣品中大腸菌群的MPN值。具體操作參見SN0169—92《中華人民共和國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大

5、腸桿菌檢驗(yàn)方法》檢驗(yàn)流程大腸菌群的測(cè)定的原理大腸菌群之一群能在37℃經(jīng)24h能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)生氣體，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。該菌主要來源于人畜糞便，故以此作為糞便污染指標(biāo)來評(píng)價(jià)食品的衛(wèi)生質(zhì)量，具有廣泛的衛(wèi)生學(xué)意義。它反映了食品是否被糞便污染，同時(shí)間結(jié)指出食品是否有腸道致病菌污染的可能。三步法：（1）發(fā)酵乳糖，產(chǎn)氣產(chǎn)酸發(fā)酵試驗(yàn)；（2）初發(fā)酵陽(yáng)性管通過伊紅美蘭平板進(jìn)行分離；（3）復(fù)發(fā)酵對(duì)分離菌做證實(shí)實(shí)驗(yàn)。食品中大腸菌群數(shù)系以每100g（或100ml）檢樣內(nèi)大腸菌群最近數(shù)(the?most?probable?number?簡(jiǎn)稱MP

6、N)表示。最近數(shù)MPN法是一種將樣品“多次（管）稀釋至無菌”的計(jì)數(shù)方法。將3個(gè)稀釋梯度的待檢驗(yàn)樣品稀釋液接種于9支或15支試管培養(yǎng)基中，每個(gè)稀釋梯度試液接種3或5支。經(jīng)過培養(yǎng)后，根據(jù)結(jié)果查閱MPN檢索表，就可以得到原樣品中微生物的估計(jì)數(shù)量。MPN檢測(cè)方法尤其適用于帶菌量、其他方法不能檢測(cè)的食品，如水、乳制品及其其他食品中大腸菌群的計(jì)數(shù)。材料3.1食品樣品：乳、肉、果汁、糕點(diǎn)、發(fā)酵調(diào)味品及其他食品。3.2菌種陽(yáng)性對(duì)照菌大腸桿菌3.3除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、均質(zhì)器、振蕩器、無菌吸管或微

7、量移液器及吸頭、無菌錐形瓶、無菌培養(yǎng)皿、菌落計(jì)數(shù)器等。3.4培養(yǎng)基和試劑：月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯、煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯、結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA)、無菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液、1mol/L氫氧化鈉（NaOH)、1mol/L鹽酸（HCI)。第一法大腸菌群MPN計(jì)數(shù)操作步驟?6.1、樣品的稀釋6.1.1、固體和半固體樣品：稱取25g樣品，放人盛有225ml磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，800or/min-10000r/min均質(zhì)1min-2min，或放人盛有225ml磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)袋中，

8、用拍擊式均質(zhì)器拍打1min-2min，制成1:10的樣品勻液。6.1.2、液體樣品：以無菌吸管吸取25ml樣品，置盛有225ml磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分棍