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《中性內(nèi)切-β-葡聚糖酶基因在里氏木霉中的重組與表達.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第27卷第1期高校化學工程學報No．1、b1．272013年2月JournalofChemicalEngineeringofChineseUniversitiesFeb2Ol3文章編號：1003—9015(2013)01—0108-05網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：／／wwwcnki．net／kcms／detail／33．1141．TQ．20121229．I718．004-htmI中性內(nèi)切一p-葡聚糖酶基因在里氏木霉中的重組與表達顧斌濤，江守坤，夏黎明(浙江大學化學工程與生物工程學系，浙江杭州31002
2、7)摘要：中性內(nèi)切一p一葡聚糖酶在棉織物生物整理方面具有重要的應用價值，研究首先從特異腐質(zhì)霉(Humicolains0le菌株中克隆到一個中性內(nèi)切-p一葡聚糖酶基因，將該基因置于里氏木霉(TrichodermareeseO纖維二糖水解酶I強啟動子Pcbhl(及其信號肽)和終止子Tcbhl之間，并以pCAMBIA1300為載體骨架構(gòu)建重組質(zhì)粒pCB-PHT。采用根瘤農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化技術(shù)將重組質(zhì)粒pCB-PHT導入里氏木霉的分生孢子中，進一步篩選得到八個重組里氏木霉轉(zhuǎn)化子。搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)72h時，發(fā)酵液的
3、中性內(nèi)切．p·葡聚糖酶活力最高可達到98．8IU．mL左右，是出發(fā)菌株的5．1倍。研究成功地實現(xiàn)了外源中性內(nèi)切．p．葡聚糖酶在絲狀真菌里氏木霉中的重組與胞外表達，有關(guān)研究結(jié)果將在牛仔布水洗工業(yè)中發(fā)揮出重要作用。關(guān)鍵詞：中性內(nèi)切．B-葡聚糖酶；里氏木霉；基因重組；表達；牛仔布；生物整理中圖分類號：Q556．9文獻標識碼：ADOh10．3969／j．issn．1003．9015．2013．01．0l8RecombinationandExpressionofNeutralEndo——GlucanaseG
4、enefromHumico~InsolensinTrichodermaReeseiGUBin-tao，JIANGShou-kun，XIALi·ming(DepartmentofChemicalEngineeringandBioengineering，ZhejiangUniversity,Hangzhou310027，China)Abstract：Neutralendo-p-glucanaseiswidelyusedforthebiofinishingapplicationinthetextilei
5、ndustry．Inordertoimprovetheneutralendo-p—glucanaseactivityofTrichodermreesei，theendo—p-glucanasegenefromHumicolainsolenswasclonedbvmereversetranscriptionPCRmethod，andwasinsertedbetweenreeseistrongpromoterPcbhl(inc1udingsecretingsignalpeptidesequence)a
6、ndterminator，furtherligatedtopCAMBIA1300vectortoconstructplasmidpCB-PHT．TheplasmidpCB-PHTWastransformedintoreeseiZU．02viaanoptimizedAgrobacteriumtumefaciensmediatedtransformation。andtheextracellularendo一6一glucanaseWasexpressedunderthecontrolofreeseist
7、rongpromoterPcbh1．Eightreeseitransformantswithsuccessfulintegrationoftheendo--glucanasegeneexpressioncassettewereobtained．After72hshaking。flaskfermentation，theendo．D—glucanaseactivityofthereeseitransformantinthefermentationsolutionreaches98．8IU．mL_。．w
8、hichiS5．1．foldashighasthatofthehoststrain．Thisresultshowsthattheendo．13．glucanasegeneiSsuccessfullytransformedandexpressedinreesei．TheTreeseitransformantsareparticularlysuitableforusesindenimwashingindustry．Keywords：neutralendo一13-glucanase；Tr
