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《雙黃連對犬肝細(xì)胞對乙酰氨基酚損傷的保護(hù)作用.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、單位代碼：學(xué)號：!QQ墨魚2QQ墨壘魚窆肝細(xì)胞對乙酰氨基酚損傷的保護(hù)作用ProtectiveEffectofShuanghuanglianonAcetaminoohen．．IniuriedCanineHepatocytesAcetaminoIiurieclanineepatocytes-學(xué)位申請人：侯聰敏指導(dǎo)教師：馬玉忠教授學(xué)科專業(yè)：臨床獸醫(yī)學(xué)學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期：二。一一年五月十四日獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研
2、究成果，也不包含為獲得邐j絲壅些太堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：侵砸縵簽字日期：爭∥，／年6月。J日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解塑j匕壅些太堂有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)洹j豎壅些太堂可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名：侄i礴鈕簽字日期：弘t，
3、年6月上日學(xué)位論文作者畢業(yè)后去向：工作單位：通訊地址：導(dǎo)師簽名：簽字日期：電話：郵編：摘要雙黃連由金銀花、黃芩、連翹3味中藥組成，具有清熱解毒、辛涼解表等功效。藥物進(jìn)入動物機(jī)體后，要在酶的參與下進(jìn)行分解、代謝。參與藥物代謝的酶主要是細(xì)胞色素P450酶系，它主要存在于肝臟的微粒體中。目的：建立分離及培養(yǎng)犬原代肝細(xì)胞的方法，并通過體外實(shí)驗(yàn)探討雙黃連及各單味藥物相互作用的分子機(jī)理以及其對肝損傷的保護(hù)作用，為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。方法：通過膠原酶兩步灌流法獲取犬肝細(xì)胞，用含多種輔助因子的Williams’E培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，每天觀察肝細(xì)胞的生長情況，并進(jìn)行圖像采集。同時(shí)用對乙酰氨基酚
4、(AP)來制備肝細(xì)胞損傷模型，收集不同時(shí)段細(xì)胞培養(yǎng)上清液，MTT法測定肝細(xì)胞的存活率，分光光度法測定細(xì)胞培養(yǎng)液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙二醛(MDA)及乳酸脫氫酶(LDH)的含量，用不同濃度的雙黃連及各單味藥處理損傷的犬肝細(xì)胞24-48h，Westen-blot法檢測犬肝細(xì)胞中CYP450的表達(dá)。結(jié)果：通過膠原酶兩步灌流法，每只犬可獲得肝細(xì)胞7．2X109個(gè)，用臺盼藍(lán)排除法檢測到6．81×109個(gè)活細(xì)胞，成活率高達(dá)94．6％。培養(yǎng)的肝細(xì)胞形態(tài)完整、生長良好，可用于藥物代謝的研究。16mMAP是致體外培養(yǎng)肝細(xì)胞損傷的最適濃度。不同濃度的雙黃連處理損傷的犬肝細(xì)
5、胞后，作用24h時(shí)CYP450的表達(dá)呈升高趨勢，但在藥物濃度達(dá)到25mM的時(shí)候CYP450的表達(dá)呈降低趨勢；48h時(shí)CYP450的表達(dá)隨雙黃連濃度的增加而呈降低趨勢，lmM、2mM與5mM組對CYP450的保護(hù)作用明顯增強(qiáng)。由此可知，1-5mM的雙黃連為最佳作用劑量。將不同濃度的金銀花、黃芩、連翹分別作用于犬肝損傷細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CYP450的表達(dá)不理想，不如雙黃連作用后所表達(dá)的有規(guī)律。結(jié)論：雙黃連能明顯減輕AP所致犬急性肝細(xì)胞損傷，對肝損傷具有一定的保護(hù)作用。關(guān)鍵詞：雙黃連；犬；原代肝細(xì)胞；損傷；保護(hù)作用ProtectiveEffectofShuanghuangJian011
6、Acetaminophen-InjuriedCanineHepatocytesMastercandidate：CongminHouAdvisor：．Prof．YuzhongMaMajor：．ClinicalVeterinaryMedicineAbstractShuanghuanglianpreparationiscomposedbyhoneysuckble,baicalskullcaprootandforsythiasuspense，withtheefficacyofheat—clearinganddetoxicating,acrid-coldherbsrelievingsup
7、erficies．Thedrugmetabolismwasinvolvedbyenzymes．Themainenzymewithdrugmetabolismwasc”odlromeP450system，whichlocatedinhepaticmicrosome．Objective：Establishamethodforisolationandcultivationofprimaryculturedcaninehepatocytes，explorethemolecularmechanismo
