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1、分類號：墨晝墨至：圣密級：公玨單位代碼：學號：100862008450抗新城疫病毒中藥活性組分篩選的研究ScreeningtheActiveComponentsinTraditionalChineseMedicineforAnti．．NewcastleDiseaseVirus學位申請人：霍曉青指導教師：董世山教授學科專業(yè)：基礎獸醫(yī)學學位類別：農學碩士授予單位：河北農業(yè)大學答辯日期：二。一一年五月二十七日獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，
2、除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得塑j量壅些態(tài)堂或其它教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。學位論文作者簽名：魂嘲簽字眺伽Ⅵ年／月∥日關于論文使用授權的說明本學位論文作者完全了解塑j匕壅些太堂有關保留及使用學位論文的規(guī)定，有權保留并向國家有關部門(機構)送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查(借)閱。本人授權邐j量壅些太堂可以將論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)
3、庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等方法加以保存或編成學位論文。(保密的學位論文在解密后應遵守此協(xié)議)學位論文作者簽名：傀％香簽字日期：9,oIf年鈿fEl導師簽名：簽字日期：摘要本研究探尋了中藥抗新城疫病毒的有效組分，為開發(fā)新型、有效、環(huán)保的中藥抗病毒藥物奠定基礎。試驗方法：收集治療畜禽病毒病的中藥處方，將出現(xiàn)頻率高的4種抗病毒中草藥(黃芪、黃芩、黃連、大青葉)作為提取有效組分的試驗材料。將中藥粉碎后用乙酸乙酯和乙醇浸提，提取物作為醇提物，將每種中藥的醇提物濃縮干燥后經(jīng)過硅膠層析柱分離后，收
4、集20種不同極性的洗脫組分，再次濃縮干燥，作為抗病毒所需篩選的藥物。利用Marcl45細胞建立抗新城疫病毒的細胞篩選模型，設立預防組、治療組、自愈組和空白對照組。預防組：細胞培養(yǎng)20h后更換含適量預防藥物的維持液，繼續(xù)培養(yǎng)8h后感染新城疫病毒，再培養(yǎng)22h后利用MTT染色法測定結果；治療組：細胞培養(yǎng)28h后與預防組、自愈組同時感染新城疫病毒，繼續(xù)培養(yǎng)8h后更換含治療藥物的細胞培養(yǎng)液，再培養(yǎng)14h后測定結果：自愈組：在細胞培養(yǎng)28h后感染病毒，用維持液代替用藥處理；空白對照組：用維持液代替病毒感染
5、和用藥處理。觀察細胞病變及死亡狀況，利用MTT染色法測定結果。MTT染色法能定量檢測細胞的增殖活性，來間接反應藥物的抗病毒效果。為此我們將MTT作為細胞培養(yǎng)物中病毒增殖情況的指示系統(tǒng)。試驗結果如下：1．中藥活性組分的提?。菏褂?00-300目的硅膠進行硅膠柱層析，成功從黃芪、黃芩、黃連、大青葉的醇提物中分離出共80種不同極性的組分。2．建立抗病毒模型：利用Marel45細胞感染新城疫病毒，感染后22h出現(xiàn)明顯的細胞病變，建立了抗病毒藥物篩選模型。3．活性組分的抗病毒效果：黃芪提取物中預防組有4種
6、組分對病毒具有抑制作用，OD值均與接毒對照組差異極顯著(P<0．01)。治療組中有5種組分抑制效果明顯，且OD值均與接毒對照組差異極顯著(P<0．01)，表明黃芪的醇提取物中有些組分有顯著抗病毒作用。黃芩提取物中預防組有5種組分對病毒具有抑制作用，其中16號組分OD值與接毒對照組差異顯著(P<0．05)，其它4種組分OD值與接毒對照組差異極顯著(P<0．01)。治療組中7號組分OD值與接毒對照組差異顯著，其他5種組分抑制效果更明顯，OD值與接毒對照差異極顯著(P7、有些組分有顯著的抗病毒作用。黃連醇提取物中預防組有4種組分對病毒具有抑制作用，其OD值與接毒對照組差異極顯著(P8、Marel45細胞所建立的篩選模型能夠有效篩選出中藥的抗病毒有效組分，利用活性組分篩選模型分別從黃芪、黃芩、黃連、大青葉等中藥醇提取物中篩選出多種具有明顯抗病毒作用的活性組分。關鍵詞：新城疫病毒；Marcl45細胞；中藥；抗病毒；篩選模型；活性組分一ScreeningtheactivecomponentsintraditionalChinesemedicineforAnti-NewcastlediseasevirusMasterCandidate：HUOXiaoqingSpecialty：Bas
