大豆活性肽的分離純化和生理活性-論文.pdf

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1、2013年第04期吉林農(nóng)業(yè)NO．04．2013(總第301期)JILINAGRICULTURE(CumulativetyNO．301)大豆活性肽的分離純化和生理活性樊永華，許輝(永城職業(yè)學(xué)院，河南永城476600)摘要：文章對(duì)大豆肽的分離純化方法和生理活性作了簡(jiǎn)要地總結(jié)。大豆蛋白肽的分離純化方法有反相高效液相色譜(RP—HPLC)、離子交換色譜(IEC)、凝膠過(guò)濾色譜(GFC)等。大豆蛋白活性肽具有多種生理功能，如：降血壓、降低膽固醇、維持氮平衡、提高消化率、抗癌、抗氧化等。關(guān)鍵詞：大豆活性肽；分離純化；生理活性中圖分類號(hào)：TS214．2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1674—0432(201

2、3)一04—0280—2大豆蛋白肽是利用酶法或微生物發(fā)酵法將大豆蛋白降解成多分子大豆肽類物質(zhì)的分離和純化尤為重要。肽、短肽和氨基酸的混合物。大豆蛋白肽是一種重要的肽來(lái)源。反相高效液相色譜分離和純化大豆活性肽時(shí)多采用增加流動(dòng)大豆蛋白肽與蛋白質(zhì)相比較，多肽具有如下特點(diǎn)：在較寬的pH范相疏水性的線性梯度洗脫法和在窄梯度的條件下延長(zhǎng)洗脫時(shí)間的圍內(nèi)溶解度高，容易在體內(nèi)消化和吸收；滲透壓低，能夠避免高方法。在洗脫的初始階段，洗脫液中有機(jī)成分濃度較低，大豆肽滲透壓導(dǎo)致的腹瀉；不容易導(dǎo)致過(guò)敏。Rerat等研究表明，短肽的分子與固定相間的疏水作用較強(qiáng)，幾乎完全被固定相吸附。隨著特點(diǎn)是吸收速度快、消耗能量低

3、、載體不易飽和，不同肽之間運(yùn)洗脫的進(jìn)行，當(dāng)洗脫液中有機(jī)成分濃度增加到能夠使得大豆多肽轉(zhuǎn)沒(méi)有競(jìng)爭(zhēng)和抑制。與固定相間作用小于流動(dòng)相與固定相間的作用時(shí)，大豆活性肽分隨著生物技術(shù)與生命科學(xué)的不斷進(jìn)步與發(fā)展，大豆多肽的功子便可從固定相上洗脫下來(lái)。洗脫液成分的極微小改變對(duì)大豆肽能越來(lái)越多的被人們所發(fā)掘，而某些活性肽的結(jié)構(gòu)與生理功能也的保留行為具有較大的影響，因而對(duì)于疏水特征相近的小分子大逐漸被人們所認(rèn)識(shí)和了解，這對(duì)活性肽的研究起到了推動(dòng)作用，豆肽也能夠完全分離。更有利于人類對(duì)大豆活性肽進(jìn)行研究與開(kāi)發(fā)。1．2離子交換色譜(IEC)法迄今為止，從大豆蛋白中已分離出降血壓肽、免疫調(diào)節(jié)肽、大豆活性肽的分離純

4、化方法之一就是離子交換色譜法。離子抗氧化肽、降膽固醇肽、抗血栓形成、促進(jìn)鈣磷及微量元素的吸交換色譜法是利用大豆多肽在一定pH值和離子強(qiáng)度條件下帶電荷收等多種純化的大豆蛋白生物活性肽，對(duì)這些大豆活性肽的研究的微弱差異，依靠靜電力與離子交換劑結(jié)合在一起時(shí)，進(jìn)入介質(zhì)情況進(jìn)行了綜述，以期為大豆活性肽的應(yīng)用提供參考。表面的可交換離子與帶相同電荷的蛋白質(zhì)分子就會(huì)發(fā)生交換的差1大豆蛋白活性肽的分離和純化異而分離。1．3凝膠過(guò)濾色譜(GFC)法目前，生產(chǎn)大豆活性肽的方法主要三種有：酶解法、微生物GFC也叫凝膠色譜分子篩法，是利用凝膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，根據(jù)分子發(fā)酵法和化學(xué)法，最為先進(jìn)的是微生物發(fā)酵法，它不僅能修飾

5、肽大小和形狀的不同進(jìn)行分離的一種方法。當(dāng)樣品進(jìn)入凝膠柱后，的苦味。還能將原料中的KTI和BBI等影響消化和口味的抗?fàn)I養(yǎng)因較大分子不能通過(guò)凝膠孔道進(jìn)入柱體內(nèi)，會(huì)先流出層析柱，而小子降解。分子則滲入凝膠柱體內(nèi)，后流出層析柱。凝膠過(guò)濾色譜法具有很大豆蛋白肽的活性易受到外界條件的影響，在過(guò)強(qiáng)的酸堿、多優(yōu)點(diǎn)，如分離條件溫和，產(chǎn)品得率高，生物活性好，分離面寬較高的溫度與劇烈震蕩等條件下都有可能失活。初始的肽液成分等。因此，凝膠過(guò)濾色譜被廣泛用于大豆多肽物質(zhì)的分離純化相對(duì)較復(fù)雜，目標(biāo)產(chǎn)物的濃度也比較低，一般低于5％，含有大量中。雜質(zhì)，某些雜質(zhì)的理化性質(zhì)和目標(biāo)產(chǎn)物有相似之處，這就提高了Ljevakovi

6、c等分離肽聚糖單體衍生物是通過(guò)凝膠過(guò)濾色譜大豆肽的分離純化的難度。傳統(tǒng)多肽分離工藝，如吸附沉淀、溶SephadexG25~lSP-SepadexC-25離子交換色譜來(lái)完成的。媒、萃取和離子交換法等步驟繁多，耗時(shí)，原料消耗量大，耗能1．4聯(lián)用技術(shù)高，得到的產(chǎn)品較少。生物技術(shù)的發(fā)展與人們對(duì)大豆肽結(jié)構(gòu)和功在大豆多肽物質(zhì)分離中，HPLc—cE聯(lián)用技術(shù)具有選擇性和靈能研究的不斷深入，大豆肽分離檢測(cè)技術(shù)也獲得了突飛猛進(jìn)的發(fā)敏度高、時(shí)間花費(fèi)短、操作簡(jiǎn)單，可用于梯度洗脫等具有獨(dú)特的展，出現(xiàn)了反相高效液相色譜法、凝膠過(guò)濾色譜法、毛細(xì)管電泳優(yōu)點(diǎn)，尤其適合大豆多肽的分離純化。法、膜分離法、各種技術(shù)手段的聯(lián)用等

7、許多高效的分離純化技術(shù)將高效液相色譜強(qiáng)的分離能力和質(zhì)譜的選擇性高、靈敏度高和手段。和提供相對(duì)分子質(zhì)量與結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點(diǎn)有機(jī)的結(jié)合起來(lái)的高效液1．1反相高效液相色譜(RP—HPLc)法相色譜一質(zhì)譜(HPLC-MS)聯(lián)用技術(shù)，為大豆活性肽組分的分離分反相高效液相色譜是一種色譜洗脫法，它以非極性的反相析提供基礎(chǔ)。Hoffmann用高效液相色譜一質(zhì)譜分離技術(shù)在3．5min介質(zhì)為固定相，流動(dòng)相是水溶液或甲醇、乙腈等極性有機(jī)溶劑。內(nèi)完成了多肽分離