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《芪蚣抗纖方抗免疫損傷性大鼠肝纖維化的分子機(jī)制研究.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2013VOL．24NO．10時(shí)珍國醫(yī)國藥2013年第24卷第10期芪蚣抗纖方抗免疫損傷性大鼠肝纖維化的分子機(jī)制研究彭丹鳳，陳桂敏(海南醫(yī)學(xué)院中醫(yī)學(xué)院，海南?？?71101)摘要：目的觀察芪蚣抗纖方(QF)對(duì)免疫損傷性肝纖維化大鼠肝組織q-TGF一131、smad2、smad3蛋白表達(dá)以及TGF一131mRNA陽性表達(dá)的影響，探討QF治療大鼠免疫損傷性肝纖維化的分子機(jī)制。方法采用豬血清腹腔攻擊法制備免疫損傷性肝纖維化大鼠模型。通過免疫組化半定量法觀察肝組織TGF—pl、smad2、smad3
2、蛋白表達(dá)；PT—PCR法提取總RNA，電泳儀觀察TGF一131mRNA陽性表達(dá)。結(jié)果免疫組化學(xué)染色顯示：模型組大鼠肝組織TGF～B1胞漿強(qiáng)陽性表達(dá)，Smad2棕色陽性著色由胞漿轉(zhuǎn)至胞核。QF干預(yù)組大鼠肝組織TGF一131、Smad2、Smad3蛋白表達(dá)下調(diào)(P<0．01)。一PCR結(jié)果顯示：伴隨著肝纖維化的形成，TGF一131mRNA陽性表達(dá)有明顯增強(qiáng)趨勢(shì)，經(jīng)過治療后TGF一131mRNA陽性表達(dá)明顯減弱。結(jié)論QF能有效干預(yù)免疫損傷性大鼠肝纖維化的形成，其分子機(jī)制可能是：通過調(diào)節(jié)TGF一131／Smads信號(hào)通路發(fā)揮抗肝纖維化作用，通過下調(diào)TGF一131mRNA的表達(dá)從而
3、減少膠原纖維合成及沉積發(fā)揮抗纖維化作用。關(guān)鍵詞：芪蚣抗纖方；肝纖維化；TGF一131、smad2、smad3蛋白表達(dá)；TGF一131mRNA陽性表達(dá)D0I標(biāo)識(shí)：doi：10．3969／．issn．1008-0805．2013．10．037中圖分類號(hào)：R285．5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1008-0805(2013)10-2403-02肝纖維化的預(yù)防與治療一直是國內(nèi)外的熱點(diǎn)研究領(lǐng)域，近年1．4造模方法除正常對(duì)照組外，其余3組均用豬血清腹腔攻擊來中醫(yī)藥在肝纖維化防治研究方面取得了一定的進(jìn)展，但大多數(shù)法(2次／周，0，5ml／只)誘發(fā)肝纖維化，攻擊8周。研究仍局限于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)或初
4、步臨床觀察，有關(guān)中藥抗肝纖維化的1．5給藥第5周開始灌胃給藥，正常對(duì)照組與模型組給生理鹽分子機(jī)制缺乏系統(tǒng)的研究。我們進(jìn)行的前期實(shí)驗(yàn)，已證實(shí)芪蚣抗水2ml／100g體質(zhì)量，QF干預(yù)組給中藥(生藥含量lg／ml，大劑量纖方(QigongKangxianprescription，QF)及拆方有明顯的抗肝纖維組2ml／200g體質(zhì)量，小劑量組1ml／200g體質(zhì)量)灌胃，1次／d，4化作用，本文旨在通過觀察芪蚣抗纖方(QF)對(duì)大鼠免疫損傷性周。實(shí)驗(yàn)共計(jì)8周。肝纖維化形成過程中肝組織TGF—pl、smad2、smad3蛋白表達(dá)以1．6標(biāo)本采集與處理實(shí)驗(yàn)過程中尾靜脈采血，實(shí)驗(yàn)結(jié)束第2
5、及TGF—plmRNA陽性表達(dá)的影響，從細(xì)胞及分子水平探討芪天，大鼠麻醉，斷頭取血，分離血清，一20％保存?zhèn)溆?；于肝左葉取蚣抗纖方抗免疫損傷性大鼠肝纖維化的作用及可能的分子機(jī)制。肝組織，制備免疫組化光鏡標(biāo)本，剩余肝組織液氮速凍，一70℃冰1材料與方法箱保存以備提取總RNA。1．1動(dòng)物雄性sD成年健康大鼠4O只，體質(zhì)量(180±20)g，購1．7檢測指標(biāo)和方法免疫組化半定量法檢測肝組織TGF一131、自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，SPF級(jí)。許可證號(hào)：SCXK(粵)smad2、smad3蛋白表達(dá)；PT—PCR法定性檢測肝組織TGF—B12008一oo20。mRNA陽性表達(dá)。1
6、．2主要藥品及試劑芪蚣抗纖方(QF)，由黃芪、蜈蚣、山慈1．8統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均使用SPSS13．0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)姑、三七、白術(shù)等組成，由河北北方學(xué)院第一附屬醫(yī)院制劑室惠分析。計(jì)量資料以±s表示，組間比較使用檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用贈(zèng)。按標(biāo)準(zhǔn)工藝制成顆粒劑備用，每袋10g，用時(shí)配成液體灌胃，PEMS3．1軟件分析，比較用檢驗(yàn)。生藥含量1g／m1)。豬血清：新鮮豬血購自?？诃偵絽^(qū)肉聯(lián)廠，自2實(shí)驗(yàn)結(jié)果提血清，分裝滅菌一20℃冰箱保存?zhèn)溆?。免疫組化試劑盒：TGF2．1免疫組織化學(xué)染色參照sP試劑盒說明書進(jìn)行，陽性細(xì)胞—B1抗體(批號(hào)：BA0290)、smad2、3(批號(hào)：BA139
7、6)；配套用稀著色為棕黃色顆粒(表1)。釋液(1：100)批號(hào)：(SA1022)；DAB顯色劑以上試劑均購自武表1各組大鼠肝組織TGF—pl、smad2、smad3漢博士德生物工程公司。TGF一131購自上海亞培生物制劑有限mRNA胞漿陽性表達(dá)情況(i±s)公司。(批號(hào)：E0124r)。PCR試劑盒：PT—PCRonestepkit(AMV)(批號(hào)：DR024A)，USA。1．3動(dòng)物分組大鼠在適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按體質(zhì)量編號(hào)，查隨機(jī)數(shù)字表，隨機(jī)分為4組，正常對(duì)照組、模型組、QF大劑量干預(yù)組、QF小劑量干預(yù)組，每組10只。與正常對(duì)
