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《沉默Gli1基因?qū)θ朔切〖?xì)胞肺癌A549／DDP順鉑耐藥性的影響.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、中國免疫學(xué)雜志2014年第3O卷doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2014．08．013沉默Glil基因?qū)θ朔切〖?xì)胞肺癌A549／DDP順鉑耐藥性的影響達(dá)麗雋李華張獻(xiàn)全(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院腫瘤科，重慶400010)中圖分類號R734．2文獻(xiàn)標(biāo)志碼A文章編號1000-484X(2014)08-1064-05[摘要]目的：以GlilsiRNA轉(zhuǎn)染人肺腺癌耐藥細(xì)胞A549／DDP，研究其對靶細(xì)胞順鉑耐藥性的影響。方法：以GlilsiRNA轉(zhuǎn)染A549／DDP細(xì)胞，分別從mRNA
2、和蛋白水平檢測干擾效果，同時(shí)檢測蛋白Bcl一2、caspase一3、cyclinD1的變化；Hoechst33258染色觀察各組細(xì)胞自發(fā)性凋亡情況；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期；MTI"法測定順鉑對各組細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)；AnnexinV—FITC法檢測順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率。結(jié)果：轉(zhuǎn)染GlilsiRNA能有效抑制Glil在mRNA和蛋白水平上的表達(dá)(P=0．001)；Bel-2和cyclinD1蛋白表達(dá)水平明顯下降(P=0．003)，caspase-3表達(dá)量顯著升高(P=0．001)；實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞
3、的自發(fā)性凋亡率高于對照組；細(xì)胞周期顯示：GlilsiRNA能使更多細(xì)胞停滯在G1期；IC50值由干擾前的(12．63±1．11)Ixg／ml／(13．81±1．14)Ixg／ml下降為干擾后的(2．65+0．85)ml(P=0．ooo)；順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率明顯提高(35．19％±3．92％vs6．43％-4-0．1l％／5．01％±0．77％，P：0．000)。結(jié)論：利用RNA干擾技術(shù)能有效抑制Glil基因的表達(dá)，提高A549／DDP細(xì)胞對順鉑的敏感性。這將為逆轉(zhuǎn)肺癌細(xì)胞的耐藥性提供新的研究思路和作
4、用靶點(diǎn)。[關(guān)鍵詞]Glil基因；肺癌；RNA干擾；順鉑耐藥；凋亡ImpactsofGlilsilencingoncisplatinresistanceoflungcancercellA549／DDPDALi-Jun，LIHua，ZHANGXian—Quan．DepartmentofOncology，theSecondAffiliatedHospital，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400010，China[Abstract]Objective：Toinves
5、tigatetheroleofGlilinDDP—resistanceinlungcancer．Methods：ADDP—resistanthumanlungadenocarcinomacelllineA549／DDPwasculturedandtransfectedwithGlilsiRNA．ThemRNAandproteinexpressionlevelsofGlilwereevaluatedbyqPT-PCR，Westernblotanalysisandimmunofluorescencemic
6、roscopy．TheexpressionofBcl-2、caspases一3、cyclinD1wasevaluatedbyWesternblotanalysis．Hoechst33258stainingandflowcytometrywereusedtodetectspontaneouscellapoptosisandcellcycle．ThecellinhibitionrateandDDP．inducedcelldeathwereexaminedbyMTrandAnnexinV—FITC／prop
7、idiumiodidestaining．Results：Glil-knockdownbyusingGill·specificsiRNAledtoamarkedlydecreaseinGlilmRNAandproteinexpressionlevels，whencomparedtonegativesiRNAtransfeetedcellsanduntreatedcontrolcells(P=0．001)．ThedownstreameffectorsofGlil，Bcl-2andcyclinD1prote
8、inswerealsoinhibited(P=0．003)，theexpressionofcaspase一3wasincreased(P=0．001)．Hoechst33258stainingshowedthatGli1depletionbyGlilsiRNAinA549／DDPcellscouldinducespontaneousapoptosis．TheresultofcellcycleshowedGlilsiRNAcouldleadmoreceHs
