土壤腐殖酸清除劑.doc

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1、技術咨詢電話：400-607-9999土壤腐殖酸清除劑SoilHumicAcidErasol貨號:M090138產品及特點土壤和湖海沉積物中都含有棕黑色或黑色的腐殖酸，它們對PCR等后續(xù)反應有極大的抑制作用，所以有效去除土壤中腐殖酸是提取土壤微生物DNA的重要環(huán)節(jié)，但是目前市場上沒有專門的產品，針對這一情況，本公司開發(fā)了本產品，專門用于對提取DNA用的土壤進行預處理，以清除腐殖酸成分。1.清除效果好，一次能使腐殖酸的濃度降低50%左右。2.適合于黃色、紅色、黑色和棕黑色等各種質地的土壤和河海沉積物。3.操作過程簡單快速，一次處理只需

2、要10分鐘。4.擴容性好，可小規(guī)模操作，也可以大規(guī)模操作。規(guī)格及成分成份100mL包裝本產品100mL使用手冊1份運輸及保存常溫運輸，4℃保存，有效期一年。使用方法1.按每1克土壤加10mL本產的比例將土壤樣品與本產品混合。2.震蕩器上震蕩3-5分鐘。3.3000-5000g室溫離心5分鐘，棄上清，沉淀的土壤可直接用于DNA提取。注意：此操作可以多次重復。具體次數(shù)取決于土壤中腐殖酸的濃度，一般每洗滌1次就可以取掉50%以上的腐殖酸，一般土壤洗滌1-3次即可。注意：本制品僅供研究使用，請勿用于臨床治療等其他用途技術咨詢電話：400-6

3、07-9999疑難解答Q:如何判斷提取的ＤＮＡ沒有腐植酸污染？A：方法一是目測法，即看得到的溶液是否無色。如果呈淡棕黑色或淡黃色，說明可能是少量殘留的未除盡的腐植酸。方法二是檢測最大光吸收。注意：有腐植酸污染并不表示DNA不能使用，有的腐殖酸并不抑制PCR擴增。Q:腐殖酸的最大吸收波長是多少？A：腐植酸（humicacid）是一大類呈棕黑色或黑色的物質,其結構千差萬別，土壤中腐殖酸的組成和特點隨土壤不同而不同，所以其最大吸收波長也各不相同。有的土壤的腐殖酸的最大吸收波長在260nm（見Appl.Environ.Microbiol.,

4、63：4993,1997），有的則在340nm，所以用特定的波長測定OD值時波長的選定要根據(jù)土壤而決定。Sigma,Fluka等公司出售的腐植酸產品成分一般比較簡單，其最大吸收波長不能推廣到成分更為復雜的土壤腐殖酸樣品。Q:是否腐植酸都會抑制后續(xù)的DNA反應？A：否，因為腐植酸是一大類物質的統(tǒng)稱，他們的結構和特性各不相同，所以是否對后續(xù)反應有影響最好通過實驗來驗證。如果用提取的DNA溶液原液進行反應而反應沒發(fā)生，而對照樣品（已知的不含污染的DNA）能夠發(fā)生，說明可能有抑制作用。Q：有什么有效方法去除DNA樣品中的腐植酸？A：可以先電

5、泳，然后用超大片段膠回收試劑MagicGelDNABACK（CAT#：M060021）純化DNA，還可以使用本公司的柱式腐植酸清除劑（CAT#：M090146）。Q：在用土壤DNA進行細菌專一性PCR時，為何沒加DNA模版的陰性對照有擴增產物出現(xiàn)？A：這是由于使用的TaqDNA聚合酶一般從E.coli表達菌株中提取，提取過程中污染了E.coli的基因組DNA，而使用的廣譜細菌專一性引物可以識別所有細菌DNA基因組DNA模版，所以會產生擴增。建議使用高質量的TaqDNA聚合酶。注意：本制品僅供研究使用，請勿用于臨床治療等其他用途技術咨

6、詢電話：400-607-9999技術資料腐殖酸及其特點腐植酸（humicacid）是動、植物的殘骸經過微生物的分解轉化和成千上萬年的復雜化學反應而產生的，廣泛存在于土壤表面和江海沉積物中的一大類呈棕黑色或黑色的物質,其典型的分子結構如下：腐殖酸的特點一是結構千差萬別，二是能與金屬離子復合，三是能跟很多有機分子相互作用。由于這些特點，一般DNA提取方法很難將各種腐殖酸分子與土壤DNA分離。污染的腐植酸可以抑制ＰＣＲ反應和限制性內切酶酶切反應，還可以降低ＤＮＡ的雜交效率和質粒的轉化效率。由于腐殖酸是一大類物質，其組成和特點隨土壤不同而不

7、同，所以其最大吸收波長也各不相同，有的土壤的腐殖酸在260nm有最大吸收（見Appl.Environ.Microbiol.,63：4993,1997），有的則在340nm。所以用特定的波長測定OD值不是定量腐殖酸的最佳方法,波長的選定要根據(jù)土壤的不同而決定。Sigma,Fluke等公司出售的腐植酸產品成分一般比較簡單，其最大吸收波長不能推廣到成分更為復雜的土壤腐殖酸樣品。注意：本制品僅供研究使用，請勿用于臨床治療等其他用途