小鼠抗核抗體(ana)igg酶聯(lián)免疫分析

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1、小鼠抗核抗體(ANA)IgG酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)本試劑盒僅供研究使用產(chǎn)品編號(hào)：CSB-E12912m最低檢測(cè)限：1ng/ml特異性：本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)小鼠anti-ANAIgG，且與其他相關(guān)抗體無(wú)交叉反應(yīng)。有效期：6個(gè)月預(yù)期應(yīng)用：ELISA法半定量測(cè)定小鼠血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中anti-ANAIgG含量。說(shuō)明1．試劑盒保存：-20℃（較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)）；2-8℃（頻繁使用時(shí)）。2．濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。3．中、英文說(shuō)明書(shū)可能會(huì)有不一致之處，請(qǐng)以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。4．剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造

2、成任何影響。實(shí)驗(yàn)原理用純化的核抗原包被酶標(biāo)板，制成固相載體。向微孔中先加入待測(cè)樣品進(jìn)行反應(yīng)，然后再加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗小鼠IgG進(jìn)行反應(yīng)，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的anti-ANAIgG呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），評(píng)估樣本中抗體的含量。。試劑盒組成及試劑配制1.酶聯(lián)板(Assayplate)：一塊（96孔）。2.樣品稀釋液(SampleDiluent)：1×20ml/瓶。3.辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗小鼠IgG稀釋液?（HRP-anti-mouseIgGDi

3、luent）：1×10ml/瓶。4.辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗小鼠IgG（HRP-anti-mouseIgG）：1×120μl/瓶（1：100）。5.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。6.濃洗滌液（WashBuffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。7.終止液（StopSolution）：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。8.陰性質(zhì)控品：1×800ul/瓶需要而未提供的試劑和器材1.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀2.高速離心機(jī)3.電熱恒溫培養(yǎng)箱4.干凈的試管和Eppendof管5.系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，最好用多通道移液器6.蒸餾水，容量

4、瓶等標(biāo)本的采集及保存1.血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或室溫過(guò)夜后于1000xg離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000xg離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。1.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000xg離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注：標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。標(biāo)本的稀釋原則：試驗(yàn)前用樣本緩沖液按1：100的比例稀釋病人樣本。所以使用2

5、ul的樣本+198ul樣本稀釋液加入聚苯乙烯試管中?；旌暇鶆颉ｊ幮再|(zhì)控品已經(jīng)準(zhǔn)備好不需要稀釋。辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗小鼠IgG的稀釋原則：臨用前以辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗小鼠IgG稀釋液稀釋?zhuān)♂屒案鶕?jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗小鼠IgG加990μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗小鼠IgG稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。操作步驟實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。如樣品濃度過(guò)高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋?zhuān)允箻悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍。1.加

6、樣：分別設(shè)陰性孔、待測(cè)樣品孔。陰性孔加陰性質(zhì)控品100μl，余孔加待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)30分鐘。2.甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，200μl/每孔，甩干。3.每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗小鼠IgG工作液100μl（取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37℃，30分鐘。4.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，200μl/每孔，甩干。5.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色10min。6.依序每孔

7、加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。7.用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行檢測(cè)。注：1.用戶(hù)在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。2.每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。3.為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪