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1、實(shí)驗(yàn)16骨骼肌單收縮的分析收縮的總和與強(qiáng)直收縮基礎(chǔ)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)(三)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、觀察骨骼肌單收縮過程。分析骨骼肌單收縮的3個(gè)時(shí)期。比較直接刺激肌肉與刺激支配肌肉的神經(jīng),其收縮曲線有何不同。2、了解骨骼肌收縮的總和現(xiàn)象。觀察不同頻率的閾上刺激引起肌肉收縮形式的改變。二、實(shí)驗(yàn)原理1、肌組織對于一個(gè)閾上強(qiáng)度的刺激,發(fā)生一次迅速的收縮反應(yīng),稱為單收縮。單收縮的過程可分為3個(gè)時(shí)期:潛伏期;收縮期和舒張期。2、兩個(gè)同等強(qiáng)度的閾上刺激,相繼作用于神經(jīng)—肌肉標(biāo)本,如果刺激間隔大于單收縮的時(shí)程,肌肉則出現(xiàn)兩個(gè)分離的單收縮;如果刺激間隔小于單收縮的時(shí)程而
2、大于不應(yīng)期,則出現(xiàn)兩個(gè)收縮反應(yīng)的重疊,稱為收縮的總和。當(dāng)同等強(qiáng)度的連續(xù)閾上刺激作用于標(biāo)本時(shí),則出現(xiàn)多個(gè)收縮反應(yīng)的疊加,此為強(qiáng)直收縮。當(dāng)后一收縮發(fā)生在前一收縮的舒張期時(shí),稱為不完全強(qiáng)直收縮;后一收縮發(fā)生在前一收縮的收縮期時(shí),各自的收縮則完全融合,肌肉出現(xiàn)持續(xù)的收縮狀態(tài),此為完全強(qiáng)直收縮。三、實(shí)驗(yàn)材料與儀器1、蟾蜍(或蛙)的坐骨神經(jīng)—腓腸肌標(biāo)本、常用手術(shù)器械、計(jì)算機(jī)采集系統(tǒng)、支架、雙凹夾、肌槽、不銹鋼盤或培養(yǎng)皿、神經(jīng)屏蔽盒、滴管、任氏液、橡皮泥、棉線。四、實(shí)驗(yàn)方法1、制備蛙或蟾蜍坐骨神經(jīng)干標(biāo)本。2、實(shí)驗(yàn)裝置的連接將神經(jīng)屏蔽盒與計(jì)算機(jī)連接,屏
3、蔽盒的地線良好接地。3、儀器的操作和實(shí)驗(yàn)參數(shù)的設(shè)置(1)本實(shí)驗(yàn)在Windows界面的PcLab平臺下進(jìn)行,打開PcLab。(2)采樣窗參數(shù)的設(shè)置點(diǎn)擊快捷工具欄上的“采樣條件設(shè)置”快捷按鈕,打開“采樣條件設(shè)置”窗口,“顯示模式”為“記憶示波”,“采樣間隔’’為25/ls,“觸發(fā)方式”為刺激器觸發(fā),“采樣窗口”為2通道。將采樣窗右側(cè)顯示控制區(qū)的參數(shù)設(shè)置為“通用(mV)”,“全通”設(shè)置為10kHz。(3)刺激參數(shù)的設(shè)置選取“主周期刺激”設(shè)定刺激參數(shù)。選擇刺激模式為“主周期”方式,刺激器參數(shù)為1,波寬(ms):0.1,幅度(v):0.1—2(根
4、據(jù)刺激需要調(diào)節(jié)),間隔(ms):50,延時(shí)(ms):1-20,根據(jù)顯示需要調(diào)節(jié)),脈沖數(shù):1。4、將蛙的坐骨神經(jīng)干標(biāo)本置于屏蔽盒內(nèi)的電極上,神經(jīng)干的中樞端置于刺激電極一側(cè),從末梢端引導(dǎo)動(dòng)作電位。5、實(shí)驗(yàn)觀察與記錄點(diǎn)擊“開始”按鈕,采樣窗開始掃描,再點(diǎn)擊“刺激”按鈕,刺激所產(chǎn)生的生物電信號即顯示在采樣窗上。如果刺激中途需要停止,則點(diǎn)擊“停止”按鈕。如果需要改變y軸的生物信號波幅,將鼠標(biāo)箭頭移至采樣窗的右側(cè)顯示控制區(qū),到上方時(shí),則出現(xiàn)“放大圖形”,到下方時(shí),則出現(xiàn)“壓縮圖形”,用鼠標(biāo)每點(diǎn)擊一次,可使生物電信號圖形成比例地放大或縮小一次。也可
5、點(diǎn)擊采樣窗最左側(cè)的“左顯示控制區(qū)”按鈕,改變放大器增益。如果需要改變x軸的生物信號的波形寬度,則用鼠標(biāo)點(diǎn)擊“X軸顯示控制區(qū)”的“橫向擴(kuò)展曲線”或“橫向壓縮曲線”,以使生物信號圖形顯示至最佳需要狀態(tài)。(1)神經(jīng)干興奮閾值的測定刺激強(qiáng)度從0.1V開始,逐漸增加刺激強(qiáng)度,當(dāng)剛剛出現(xiàn)動(dòng)作電位時(shí)的刺激強(qiáng)度,即為神經(jīng)干的興奮閾值。(2)雙相動(dòng)作電位在刺激閾值的基礎(chǔ)上逐漸加大刺激強(qiáng)度,可見動(dòng)作電位的圖形為雙相,而且其幅值隨刺激強(qiáng)度增大而加大。當(dāng)刺激增加到一定強(qiáng)度時(shí),可見動(dòng)作電位的幅值不再增大。(3)動(dòng)作電位參數(shù)的測量用鼠標(biāo)點(diǎn)擊“快捷工具欄”的“觀察”
6、,移動(dòng)鼠標(biāo),測出動(dòng)作電位的一系列參數(shù)。(4)單相動(dòng)作電位在兩個(gè)引導(dǎo)電極之間損傷神經(jīng)干標(biāo)本,即可使原來的雙相動(dòng)作電位的下相消失,變?yōu)閱蜗?;注意上相?dòng)作電位的圖形有什么變化。6、開啟計(jì)算機(jī)采集系統(tǒng),連接張力傳感器(100g)與刺激輸出。將標(biāo)本的骨頭固定在肌槽的骨頭固定孔內(nèi),腓腸肌肌腱上的扎線與張力傳感器應(yīng)變梁相連,調(diào)節(jié)好扎線的張力,不可過松或過緊,以使肌肉自然拉平為宜(保證肌肉一旦收縮,即可牽動(dòng)張力傳感器的應(yīng)變梁)。將神經(jīng)搭在肌槽的電極上,接通電極與刺激輸出的線路。7、實(shí)驗(yàn)觀察(1)收縮的總和啟動(dòng)波形顯示圖標(biāo),調(diào)節(jié)掃描速度為5—10mm/s
7、,調(diào)節(jié)單收縮幅度為1.5cm左右。調(diào)節(jié)刺激設(shè)置為雙刺激方式,并使兩個(gè)閾上刺激強(qiáng)度相等。先調(diào)節(jié)刺激間隔大于單收縮的時(shí)程,然后逐漸縮短刺激間隔,分別觀察并記錄肌肉收縮形式的變化(2)強(qiáng)直收縮減慢掃描速度(5mm/s)并衰減振幅增益,使單收縮的幅度減小至3~5mm。調(diào)節(jié)刺激設(shè)置為串刺激方式,分別以1.5次/s(串長為5)、6次/s(串長為10)、10次/s(串長為20)、30次/s(串長為35)和45次/s(串長為50)的頻率刺激標(biāo)本,觀察并記錄肌肉收縮曲線的變化。注意用任氏液濕潤標(biāo)本,兩次刺激之間稍有間歇,使肌肉休息片刻。五、注意事項(xiàng)1、實(shí)
8、驗(yàn)過程中注意保持標(biāo)本的活性良好,經(jīng)常用任氏液濕潤之。2、如果在顯示窗上發(fā)現(xiàn)動(dòng)作電位圖形倒置,將引導(dǎo)電極位置對換即可。六、作業(yè)1、本實(shí)驗(yàn)的潛伏期是指什么?時(shí)間如何計(jì)算?其中包括哪些時(shí)間因素及生理過程?2、刺激