膠體金快速免疫診斷技術(shù)

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1、免疫層析快速診斷技術(shù)層析法技術(shù)優(yōu)勢:簡單現(xiàn)場快速1.打開包裝取出試紙條2.直接插入待測樣品中3.目測讀出結(jié)果（3-10分鐘內(nèi)）與常規(guī)診斷方法相比優(yōu)點缺點快速：全部檢測過程僅需3-10分鐘。簡便：不需其它任何儀器設(shè)備，操作也極其簡單，無需專業(yè)人員，攜帶方便，可隨時隨地進行。廉價：單個測試條成本極低可單份檢測：對標(biāo)本既能成批檢測，又可單份檢測，可立刻拿到結(jié)果，不必等待。穩(wěn)定性好：金標(biāo)試劑穩(wěn)定，可長期保存。檢測標(biāo)本種類多：既可用于查血，又可用于檢尿或唾液，因而適合各種檢查定量問題靈敏度問題技術(shù)應(yīng)用類別應(yīng)用領(lǐng)域檢測的物質(zhì)人類醫(yī)學(xué)各級醫(yī)院,血站,CDC,防疫站,診斷中心；家庭自檢

2、；商檢系統(tǒng)；邊檢口岸；公安系統(tǒng).傳染病（乙肝五項,HIV,SARS等）標(biāo)志物（AFP、肌鈣蛋白、糞便血紅蛋白等）女性妊娠（hCG(早孕),LH,FSH)毒品（嗎啡,K粉,搖頭丸,冰毒）農(nóng)牧業(yè)畜牧獸醫(yī)站,商檢系統(tǒng),邊檢口岸,農(nóng)牧類院系和研究所傳染病（禽流感,獸瘟疫等）環(huán)境環(huán)保監(jiān)測部門,研究機構(gòu)有害物質(zhì)超標(biāo)食品安全食品安全檢測中心,各監(jiān)管部門農(nóng)獸藥殘留（磺胺類、瘦肉精等）,大腸桿菌,黃曲霉素試紙條組成結(jié)構(gòu)測試線（T線）控制線（C線）膠體金墊吸水濾紙樣品墊NC膜（硝酸纖維素膜）層析方向PVC底板有4個組分：⑴、吸水紙（樣品墊）。⑵、玻璃纖維膜（膠體金墊）。膜上吸附著干燥的金標(biāo)抗體

3、（流動帶）。⑶、硝酸纖維素膜，膜上包被著抗原或抗體條帶和能與標(biāo)記物直接起反應(yīng)的質(zhì)控物條帶（檢測帶）。⑷、吸水紙。以上各組份首尾互相銜接?；驹硎菍⒁阎奶禺愋钥乖蚩贵w固定于硝酸纖維素膜上某一區(qū)帶作為檢測帶，在樣品區(qū)滴加樣品后，借助毛細(xì)作用，樣品泳動至玻璃纖維膜，金標(biāo)復(fù)合物溶解，并與樣品進行抗原抗體反應(yīng)，形成復(fù)合物，繼續(xù)泳動至硝酸纖維素膜的檢測區(qū)，帶有金標(biāo)記的復(fù)合物被檢測區(qū)抗原或抗體捕獲，呈現(xiàn)紅色條帶。如樣品中沒有待測抗原或抗體，則不發(fā)生結(jié)合，即不顯色。在硝酸纖維素膜檢測區(qū)附近一般再固定上針對金標(biāo)結(jié)合物相應(yīng)的抗原或抗體作為質(zhì)控帶，無論樣品中有無待測物，質(zhì)控線都應(yīng)顯示，如無

4、，則檢測失敗。整個過程一般在15分鐘內(nèi)完成，操作簡單、快速，且不需任何儀器。免疫層析法檢測原理分類介紹膠體金免疫層析法檢測流腦抗體（間接法）膠體金標(biāo)記的兔抗人IgG，樣品中的流腦抗體與膠體金標(biāo)記的抗人IgG結(jié)合，沿硝酸纖維素膜移動，在包被有流腦抗原結(jié)合，出現(xiàn)紅色反應(yīng)線。免疫層析法檢測原理分類介紹（雙抗體夾心）（以HCG檢測為例）HCG-β亞基抗體Y2，羊抗鼠二抗固定于硝酸纖維素膜上，金標(biāo)HCG-α亞基單抗Y1固定于玻璃纖維素膜上。免疫層析法檢測原理分類介紹（競爭反應(yīng)）（以嗎啡檢測為例）嗎啡偶聯(lián)物和膠體金標(biāo)記的抗嗎啡單克隆抗體固定于膜上測試區(qū)。通過嗎啡偶聯(lián)物和尿液中的嗎啡競爭

5、結(jié)合金標(biāo)單克隆抗體，最小檢出量300ng/ml。結(jié)果判定：陽性（+）：嗎啡300ng/ml以上，質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)一條紫紅色條帶，測試區(qū)內(nèi)不出現(xiàn)紫紅色條帶。嗎啡濃度高于300ng/ml時，膠體金抗體與嗎啡全部結(jié)合，從而不與嗎啡偶聯(lián)物結(jié)合而不出現(xiàn)紫紅色條帶。陰性（-）：嗎啡在300ng/ml以下。出現(xiàn)兩條紫紅色條帶，一條在測試區(qū)內(nèi)，另一條在質(zhì)控區(qū)內(nèi)。嗎啡濃度低于300ng/ml時，膠體金抗體不能與嗎啡全部結(jié)合。這樣，膠體金抗體在層析過程中會被固定在膜上的嗎啡偶聯(lián)物結(jié)合，測試區(qū)內(nèi)會出現(xiàn)一條紫紅色條帶。無效：質(zhì)控區(qū)未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑盒已變質(zhì)損壞?？贵wAnti

6、body來源差異:鼠抗,兔抗和羊抗種類差異:單抗,多抗?jié)舛?濃縮溶解液:不含鹽抗原抗體生物原料抗原Antigen全病毒抗原重組抗原膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，稱為膠體金。根據(jù)膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng)，加上結(jié)合物的免疫和生物學(xué)特性，因而使膠體金廣泛地應(yīng)用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域。容器硅化處理：玻璃表面少量的污染會干擾膠體金顆粒的生成，一切玻璃容器應(yīng)絕對清潔，用前經(jīng)過酸洗、硅化。將玻璃容器浸泡于５％二氯二甲硅烷的氯

7、仿溶液中１分鐘，室溫干燥后蒸餾水沖洗，再干燥備用。膠體金的制備膠體金的制備枸櫞酸三鈉還原法15nm、18nm～30nm、40nm或50nm膠體金顆粒的制備：取0.01％HAuCl4水溶液100ml，加熱煮沸。根據(jù)需要迅速加入1％枸櫞酸三鈉水溶液4ml、2.5ml、1ml或0.75ml，繼續(xù)煮沸約5min，出現(xiàn)橙紅色。這樣制成的膠體金顆粒則分別為15nm、18～20nm、41nm和50nm顏色與顆粒的關(guān)系.最佳標(biāo)記顆粒大小40nm.1％檸檬酸三鈉ml0.300.450.701.001.502.00金溶膠顏色藍灰紫灰紫