何海棟的設(shè)計性實驗

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1、【研究題目】新型抗凝藥利伐沙班的抗凝作用【理論依據(jù)及研究現(xiàn)狀】血液凝固實際上是一系列凝血因子的酶促反應(yīng)。整個凝血過程可人為地分為三個階段：第一階段為血液凝血活酶形成，主要是通過內(nèi)源性凝血途徑或外源性凝血途徑發(fā)生;第二階段為凝血酶形成期：血漿中的凝血酶原在凝血活酶和鈣離子的作用下，轉(zhuǎn)變?yōu)槟?第三階段為纖維蛋白的形成：纖維蛋白原經(jīng)凝血酶的作用，形成纖維蛋白單體，當這些單體達到一定濃度時即可自動聚集合成纖維蛋白，而血漿中的凝血因子XII經(jīng)凝血酶激活后，使可溶性纖維蛋白形成緊密的不溶性纖維蛋白，至此整個

2、血液凝固過程完成（圖1-1）圖1-1利伐沙班高度選擇性和可競爭性抑制游離和結(jié)合的Xa因子以及凝血酶原活性，以劑量-依賴方式延長活化部分凝血活酶時間板(PT)和凝血酶原時間(aPTT)。利伐沙班與磺達肝素鈉／肝素的本質(zhì)區(qū)別在于它不需要抗凝血酶III參與，可直接拮抗游離和結(jié)合的Xa因子。而肝素則需要有抗凝血酶III才能發(fā)揮作用，且對凝血酶原復(fù)合物中的Xa因子無效。利伐沙班是全球第一個口服直接Xa因子抑制劑，在（I、II期臨床研究）中主要測定利伐沙班是否具有可預(yù)測的藥效學性質(zhì)，以凝血酶原時間(s)為縱坐標

3、，利伐沙班血藥濃度(μg/l)為縱坐標，測定健康人群(I期)，骨科大手術(shù)患者（II期）凝血酶原時間以及與利伐沙班血藥濃度的關(guān)系，得出在健康人群和骨科大手術(shù)的患者中，利伐沙班血藥濃度和凝血酶原時間的關(guān)系是一致的。由此確定利伐沙班具有2條重要的藥效學性質(zhì)：1利伐沙班對Xa因子活性的抑制呈劑量依賴性，導致凝血酶原時間延長和抑制凝血酶的產(chǎn)生。2.利伐沙班的血藥濃度與藥效學作用密切相關(guān)，也就是延長凝血酶原時間和抑制凝血酶產(chǎn)生。其次在基于I、II期臨床研究，得出利伐沙班在下列人群中無需調(diào)整劑量。利伐沙班RECO

4、RDIII期系列臨床研究（全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)和全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)后VTE預(yù)防）得出利伐沙班全在預(yù)防利伐沙班全髖或全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)后靜脈血栓栓塞癥（VTE）的療效顯著高于低分子肝素。目前學術(shù)界普遍認為利伐沙班具備理想抗凝藥物的特點，在臨床上主要用于用于擇期髖關(guān)節(jié)或膝關(guān)節(jié)置換手術(shù)成年患者，以預(yù)防靜脈血栓形成（VTE）?！狙芯績?nèi)容】血液凝固的實驗測定方法，利伐沙班的抗凝作用的機制以及與傳統(tǒng)抗凝藥物肝素的抗凝作用的比較?！狙芯糠椒ā恳唬畬嶒瀸ο螅杭彝枚鞑募八幤罚菏中g(shù)臺，1ml、2ml、10ml注射器，動脈夾，手術(shù)

5、器械一套，7.5#針頭，頭皮針頭，木夾，25%烏拉坦，生理鹽水，小試管若干，1%的肝素鈉注射液若干，1.3%利伐沙班注射劑若干，三通管等。三．實驗組與對照組的處理實驗組一（1、2、3）給予肝素鈉注射液實驗組二（4、5、6）給予利伐沙班注射液對照組給予生理鹽水四．觀察指標：1.實驗組一發(fā)生凝血所需的時間2.實驗組二發(fā)生凝血所需的時間3.對照組發(fā)生凝血所需的時間【實驗步驟】1.取家兔，給兔子編號1、2、3、4、5、6、7、8，并稱重，以25%烏拉坦溶液4ml/kg體重耳緣靜脈注射麻醉，麻醉后將每只家兔仰

6、臥位固定手術(shù)臺上，正中切開頸部皮膚，分離一側(cè)頸總動脈，結(jié)扎遠心端，并在近心端夾上動脈夾，以阻斷血流，三通管向心臟方向插入頸總動脈內(nèi)，用線打結(jié)固定。2.其中，1,2,3號三只家兔每只以10mg/kg的劑量耳緣靜脈注入1%肝素鈉注射液，4,5,6三只家兔每只以0.5mg/kg的劑量耳緣靜脈注入1.3%利伐沙班注射液，6,7,8三只兔子不做處理。3.打開三通管，每組放血約1ml至于一支潔凈的小試管內(nèi)，然后將試管放入37攝氏度的水浴箱中。3min后，每隔半分鐘將試管傾斜一次，直至試管倒置血液不流動為止，并記

7、錄每組凝血發(fā)生的時間。4.將觀察到的實驗結(jié)果填入下表利伐沙班和肝素對凝血過程的影響組別體重給藥劑量（g）（ml）凝血發(fā)生的時間（t）實驗組一123實驗組二456對照組78【預(yù)期實驗結(jié)果】實驗組一與實驗組二發(fā)生的凝血時間都比對照組要緩慢該實驗說明利伐沙班和肝素都有明顯的抗凝作用，但相比于肝素具有理想抗凝藥物的特點1.口服，一天一次2.起效快速（給藥后2－4小時達到血藥濃度峰值）3.固定劑量4.生物利用度高（10mg，生物利用度接近100％）5.治療窗寬，與食物、藥物相互作用小6.預(yù)防全髖或全膝關(guān)節(jié)置換

8、術(shù)后VTE的療效顯著優(yōu)于依肝素，且安全性顯著優(yōu)于肝素【注意事項】1.水浴溫度應(yīng)嚴格控制在37攝氏度，以免影響實驗結(jié)果。2.在傾斜試管時，動作要輕，以免加速血液凝固。3.每次給藥后用生理鹽水沖洗針管?！緟⒖嘉墨I】1.龔永生、陳醒言《醫(yī)學機能學實驗教程(供臨床口腔檢驗眼視光預(yù)防影像麻醉和護理等醫(yī)學類專業(yè)用)》；出版社：人民衛(wèi)生出版社；出版日期：2010年07月2.楊寶峰(2010),藥理學,北京,人民衛(wèi)生出版社3.徐佳俊，黃賽杰，蘇克劍,新型口服抗凝藥利伐沙班，中國醫(yī)藥導