ELISA實驗中各種方法原理及優(yōu)缺點比較.doc

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1、ELISA實驗中各種方法原理及優(yōu)缺點比較ELISE實驗是指酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinkedimmunosorbentassay)指在固定相上進(jìn)行免疫酶技術(shù)，其依據(jù)有1：蛋白質(zhì)可以吸附到固定相上而不改變其活性，2：抗原或抗體與酶交聯(lián)以后仍可保持其活性及酶的催化活性，3：交聯(lián)后的酶可以與反應(yīng)底物進(jìn)行反應(yīng)，并催化其分解，產(chǎn)生有色物質(zhì)。根據(jù)有色物質(zhì)的多少，即顏色的深淺，通過酶標(biāo)儀測定其顏色與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)顏色的差異，根據(jù)酶測曲線得出其濃度。ELISE實驗基本類型有直接法、間接法、抗體夾心法、競爭法、抑制法?，F(xiàn)將各種方法原理及優(yōu)缺點總結(jié)如下：一：直接法直接法利用抗原結(jié)合在固定相上

2、面，用酶聯(lián)抗體直接與抗原結(jié)合，而后分解底物。washBSAwashwashTMB二：間接法TMBwashwashwash間接法利用抗原與固定相結(jié)合后，用一抗與抗原結(jié)合，再用二抗V區(qū)和一抗S區(qū)結(jié)合。酶聯(lián)抗體位于二抗上。由于一抗V區(qū)具有穩(wěn)定性，S區(qū)具有可變性，所以在與不同抗原結(jié)合時，V區(qū)變化而S區(qū)不變，故間接法可以測定三：雙抗夾心法利用抗體錨定在固定相上，抗原與其結(jié)合后，抗原的另外一個表位與酶聯(lián)抗體結(jié)合，催化底物分解，故雙抗夾心法適用于某些大分子的具有至少雙表位的抗原四：競爭法TMB競爭法是指針對抗原上同一抗原表位，分別用抗體與酶聯(lián)抗體先后與其結(jié)合，抗體占據(jù)表位后，酶聯(lián)抗體不能

3、再與抗原結(jié)合而被洗滌液沖走，wash故催化底物反應(yīng)的能力相應(yīng)下降。此法適應(yīng)于小分子或只有一個抗原表位或重復(fù)抗原wash表位的抗原。