常用培養(yǎng)基的配方.doc

《常用培養(yǎng)基的配方.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基原理　　一般用來鑒定大腸桿菌。　　伊紅為酸性染料，美藍(lán)為堿性染料?！　‘?dāng)大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時細(xì)菌帶正電荷被染成紅色，再與美藍(lán)結(jié)合形成紫黑色菌落，并帶有綠色金屬光澤?！　≡趬A性環(huán)境中不分解乳糖產(chǎn)酸的細(xì)菌不著色，伊紅和美藍(lán)不能結(jié)合，故沙門氏菌等為無色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培養(yǎng)基上不生長?！　〕Ｓ玫囊良t美藍(lán)乳糖培養(yǎng)基，可用來鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細(xì)菌。如果有大腸桿菌，因其強烈分解乳糖而產(chǎn)生大量的混合酸，菌體帶H+，故菌落被染成深紫色，從菌落表面的反射光中還可以看到金屬光澤?！　∮?/p>

2、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基鑒定水中大腸桿菌　　步驟如下：　?、僦谱饕良t美藍(lán)培養(yǎng)基，趁熱注入培養(yǎng)皿中，凝成平板，待用?！　、谟脺邕^菌的錐形瓶盛取河水或溝水，按1：10稀釋?！　、廴?.1毫升稀釋液接種于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上。用平板劃線分離法進行分離。　?、軐澗€后的培養(yǎng)皿倒置37℃溫箱中培養(yǎng)18～24小時。培養(yǎng)基中會出現(xiàn)大腸桿菌菌落，菌落中心呈暗藍(lán)黑色，發(fā)金屬光澤?！　、輰⒕浣臃N于斜面培養(yǎng)基上（由營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基制成）。配置方法　　蛋白胨10g　　乳糖10g　　磷酸氫二鉀2g　　瓊脂20~30g　　蒸餾水1000ml　　2%伊紅水

3、溶液20ml　　0.5%美藍(lán)水溶液13ml　　儲備培養(yǎng)基的制備　　先將瓊脂加至900ml蒸餾水，加熱溶解，然后加入磷酸氫二鉀及蛋白胨，混勻使之溶解，再以蒸餾水補足至1000ml，調(diào)整PH為7.2~7.4。趁熱用脫脂棉或絨布過濾，再加入乳糖，混勻后定量分裝于燒瓶內(nèi)，置高壓蒸汽滅菌器內(nèi)以115℃滅菌20min，貯存于冷暗處備用?！　≈品▽⒌鞍纂?、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中，校正PH，分裝于燒瓶內(nèi)，121℃高壓滅菌15min備用。臨用時加入乳糖并加熱溶化瓊脂，冷至50～55℃，加入伊紅和美藍(lán)溶液，搖勻，傾注平板。麥康凱

4、培養(yǎng)基原理1.全稱麥康凱瓊脂或是麥康凱培養(yǎng)基2.一種用于分離鑒定細(xì)菌的培養(yǎng)基，大腸桿菌在其上呈紅色或粉紅色，有的菌落只是中間呈現(xiàn)紅色。配置方法蛋白胨?17g脙胨3g豬膽鹽(或牛、羊膽鹽)??5g氯化鈉?5g瓊脂?17g蒸餾水1000mL乳糖10g0.01%結(jié)晶紫水溶液????10mL0.5%中性紅水溶液?????5mL麥康凱-制法?1將蛋白胨、胨、膽鹽和氯化鈉溶解于400mL蒸餾水中，校正pH7.2。將瓊脂加入600mL加熱溶解。將兩液合并，分裝于燒瓶內(nèi)，121℃高壓滅菌15min備用。2臨用時加熱溶化瓊脂，趁熱

5、加入乳糖，冷至50～55℃時，加入結(jié)晶紫和中性紅水溶液，搖勻后??傾注平板。注：結(jié)晶紫及中性紅水溶液配好后須經(jīng)高壓滅菌。吲哚試驗吲哚（indol）試驗有些細(xì)菌如大腸埃希菌、變形桿菌、霍亂弧菌等能分解培養(yǎng)基中的色氨酸生成吲哚（靛基質(zhì)），經(jīng)與試劑中的對二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈紅色，是為吲哚試驗陽性。LB培養(yǎng)基配方胰化蛋白胨?1g??????酵母提取物??0.5g??????NaCl??1g??????瓊脂??1.5-2g?????水?100mlLB培養(yǎng)基-LB培養(yǎng)基條件LB培養(yǎng)基-固態(tài)培養(yǎng)基LB固體培養(yǎng)

6、基1L和液體一樣，加15g瓊脂粉，一定要在溫度降下之前加好抗生素，并且倒好板。LB固體培養(yǎng)基倒板1.配制：100mlLB培養(yǎng)基加入1.5g瓊脂粉2.抗生素的加入：高壓滅菌后，將融化的LB固體培養(yǎng)基置與55℃的水浴中，待培養(yǎng)基溫度降到55℃時（手可觸摸）加入抗生素，以免溫度過高導(dǎo)致抗生素失效，并充分搖勻。3.倒板：一般10ml倒1個板子。培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后，打開蓋子，在紫外下照10-15分鐘。4.保存：用封口膠封邊，并倒置放于4℃保存，一個月內(nèi)使用。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（營養(yǎng)瓊脂）?配方蛋白胨10g；牛肉膏3g；氯化

7、鈉5g；瓊脂15～20g；蒸餾水1000mL；制法將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內(nèi)，加入15%氫氧化鈉溶液約2mL，校正pH至7.2～7.4。加入瓊脂，加熱煮沸，使瓊脂溶化。分裝燒瓶，121℃高壓滅菌15min。注：此培養(yǎng)基可供一般細(xì)菌培養(yǎng)之用，可傾注平板或制成斜面。如用于菌落計數(shù)，瓊脂量為1.5%；如作成平板或斜面，則應(yīng)為2%。甲基紅試驗甲基紅試驗-化學(xué)屬性甲基紅（MethylRed）試驗?zāi)c桿菌科各菌屬都能發(fā)酵葡萄糖，在分解葡萄糖過程中產(chǎn)生丙酮酸，進一步分解中，由于糖代謝的途徑不同，可產(chǎn)生乳酸，琥珀酸、醋酸和

8、甲酸等大量酸性產(chǎn)物，可使培養(yǎng)基PH值下降至pH4.5以下，使甲基紅指示劑變紅。甲基紅試驗-試驗方法挑取新的待試純培養(yǎng)物少許，接種于通用培養(yǎng)基，培養(yǎng)于36±1°C或30°C（以30°C較好）3~5天，從第二天起，每日取培養(yǎng)液1ml，加甲基紅指示劑1~2滴，陽性呈鮮紅色，弱陽性呈淡紅色，陰性為黃色。迄至發(fā)現(xiàn)陽性或至第5天仍為陰性、即可判定結(jié)果。甲基紅為酸性指示劑，pH范圍為4