大鼠抗弓形蟲(chóng)igm抗體酶聯(lián)免疫分析

《大鼠抗弓形蟲(chóng)igm抗體酶聯(lián)免疫分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。

1、大鼠抗弓形蟲(chóng)IgM抗體酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)本試劑盒僅供研究使用產(chǎn)品編號(hào)：CSB-E12822r特異性：本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)大鼠抗弓形蟲(chóng)IgM抗體，且與其他相關(guān)抗體無(wú)交叉反應(yīng)。有效期：6個(gè)月預(yù)期應(yīng)用：ELISA法半定量測(cè)定大鼠血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中抗弓形蟲(chóng)IgM抗體含量。說(shuō)明1．試劑盒保存：-20℃（較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)）；2-8℃（頻繁使用時(shí)）。2．濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。3．中、英文說(shuō)明書(shū)可能會(huì)有不一致之處，請(qǐng)以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。4．剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。試劑盒組成及試劑配制1.酶聯(lián)

2、板(Assayplate)：一塊（96孔）。2.酶結(jié)合物（Conjugate）：2×6ml/瓶。3.樣品稀釋液(SampleDiluent)：2×6ml/瓶。4.陽(yáng)性對(duì)照（PositiveControl）：1×0.5ml/瓶。5.陰性對(duì)照（NegativeControl）：1×0.5ml/瓶。6.底物溶液A（SubstrateA）：1×7ml/瓶。7.底物溶液B（SubstrateB）：1×7ml/瓶。8.濃洗滌液（WashBuffer）：1×15ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋20倍。9.終止液（StopSolution）：1×7ml/瓶。需要而未提供的試劑和器材1.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)

3、儀2.高速離心機(jī)3.電熱恒溫培養(yǎng)箱4.干凈的試管和Eppendof管5.系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，最好用多通道移液器6.蒸餾水，容量瓶等標(biāo)本的采集及保存1.血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或室溫過(guò)夜后于1000xg離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000xg離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。操作步驟實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。如樣品濃度過(guò)高時(shí)，用樣品稀釋液

4、進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。1.加樣：分別設(shè)空白孔，不加任何溶液；設(shè)陰性對(duì)照孔2孔，加陰性對(duì)照100μl；設(shè)陽(yáng)性對(duì)照孔2孔，加陽(yáng)性對(duì)照100μl；余孔加100μl樣本稀釋液，然后直接加待測(cè)樣本5μl。注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃放置30分鐘。1.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，200μl/每孔，甩干。2.每孔加酶結(jié)合物100μl，充分混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃放置20分鐘。3.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，200μl/每孔，甩干。4.依序每孔加底物溶液A和

5、B各50μl，37℃避光顯色10分鐘。5.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。6.用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。注：1.用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。2.每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。3.為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。4.未使用完的酶

6、標(biāo)板或者試劑，請(qǐng)于2-8℃保存。5.建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。洗板方法手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。計(jì)算1.目測(cè)法：比臨界對(duì)照顯色深的樣本為陽(yáng)性，比臨界對(duì)照顯色相同或顯色淺的為陰性。2.酶標(biāo)儀測(cè)定：判斷值（OD值）=陰性對(duì)照平均OD值×2.1，樣品OD值大于判斷值為陽(yáng)性，小于等于為陰性。陰性對(duì)照平均OD值小于0.05時(shí)，按0.05計(jì)算。注

7、意事項(xiàng)1.當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。2.洗滌過(guò)程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。3.一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4.如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以稀釋倍數(shù)。5.在配制檢測(cè)溶液工作液時(shí)，請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。6.底物請(qǐng)避光保存。7.不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。