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《大鼠胰島素(insulin)elisa試劑盒說明書》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在應用文檔-天天文庫。
1、大鼠胰島素(Insulin)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書廈門慧嘉生物科技有限公司本試劑盒僅供研究使用。藥品名稱：通用名：大鼠胰島素(Insulin)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用目的：本試劑盒用于測定大鼠血清，血漿及相關液體樣本中胰島素(Insulin)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠胰島素(Insulin)水平。用純化的大鼠抗-胰島素(Insulin)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入胰島素(Insulin)與HRP標記的胰島素（INS）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在H
2、RP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰島素(Insulin)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠胰島素(Insulin)濃度。試劑盒組成120倍濃縮洗滌液30ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品（18mU/L）0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡
3、快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50
4、μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為12mU/L，8mU/L，4mU/L，2mU/L，1mU/L）。2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μ2l（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。1.溫育：用封
5、板膜封板后置37℃溫育30分鐘。2.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用3.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。4.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。5.溫育：操作同3。6.洗滌：操作同5。7.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.8.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。9.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。計算以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐
6、標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。注意事項1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請每次測定的同時做標準曲線，
7、最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請避光保存。7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9．本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。檢測范圍：15.6nIU/ml-1000nIU/ml靈敏度：3.9nIU/ml規(guī)格：96人份/盒保存條件及有效期1．試劑盒保存：
