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《呋喃妥因（adh）酶聯(lián)免疫分析（elisa）》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、呋喃妥因(ADH)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。1使用目的：本試劑盒用于檢測動物組織（雞、豬、牛、魚、蝦等）、牛奶和蜂蜜中呋喃妥因(ADH)殘留的定量檢測。2實驗原理本試劑盒采用競爭ELISA方法，在微孔板包被有呋喃妥因(ADH)偶聯(lián)抗原，加入呋喃妥因(ADH)標準品或樣品，游離呋喃妥因(ADH)與微孔條上預包被的呋喃妥因(ADH)偶聯(lián)抗原互相競爭抗呋喃妥因(ADH)抗體酶標記物，用TMB底物顯色，加入終止液后顏色由藍色變?yōu)辄S色，用酶標儀在450nm波長下進行檢測，吸光值與樣品中呋喃妥因(ADH)含量成反比，通過標準曲線計算樣品中呋喃妥
2、因(ADH)的含量。3試劑盒組成3.1預包被的呋喃妥因(ADH)偶聯(lián)抗原的可拆酶標板：1塊（12孔×8條）。3.2呋喃妥因(ADH)標準品：6瓶（1ml/瓶），含量分別是：0ppb，0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb。3.3抗呋喃妥因(ADH)抗體酶結合物：1瓶（6ml）。3.4顯色液A：1瓶（6ml）。3.5顯色液B：1瓶（6ml）。3.6終止液：1瓶（6ml），2M硫酸。3.7樣本稀釋液：1瓶（10×,6ml），用于樣品稀釋用。3.8濃縮洗滌液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。3.9說明書一份。4需要而未提供的材料4.1設備4.
3、1.1波長450nm酶標儀。4.1.2粉碎機。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相當?shù)臑V紙。4.1.7微量移液器。4.2試劑4.2.1去離子水或蒸餾水。4.2.2甲醇。5貯存5.1試劑盒貯存于2~8℃，切勿冷凍5.2未用完的微孔板應該密封干燥保存6注意事項6.1使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。36.2不要使用過期試劑盒。6.3試劑盒使用前，將試劑恢復至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時。6.4標準品中含有呋喃妥因(ADH)，使用時應特別注意，操作時應帶手套。6.5終止液中含有硫酸，使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。6.6不同
4、標準品、樣品所用吸頭不能混用，否則會影響試驗結果。6.7不同批號試劑盒中的試劑不得混用；不同標準品、樣品所用吸頭不得混用，否則會影響實驗結果。6.8稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液，否則會影響實驗結果6.9混合試劑時應避免起泡。7工作液準備7.1呋喃妥因(ADH)標準品溶液：0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb7.2濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用7.3樣本稀釋液：用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用7.3顯色劑：已備用，避免光線直照7.4反應終止液：已備用8樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴格按說明書
5、操作，提取過程中應準確稀釋，否則會出現(xiàn)結果不準確，樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存）8.1取10g粉碎的樣品，加20ml70%甲醇溶液8.2強力振蕩3分鐘8.3用WhatmanNo1濾紙過濾8.4取25μl處理后的樣品，加入25μl樣本稀釋液于反應孔中（樣本稀釋倍數(shù)為2）9酶免分析步驟9.1實驗須知9.1.1實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫（25±2℃），時間約2小時。回溫至室溫（25±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的精確度和準確度。9.1.2使用后請立即將試劑放回2~8℃保存9.1.3請
6、不要改變分析程序9.1.4請使用精確的微量移液器9.1.5操作一旦開始，請不要中斷任何程序9.1.6ELISA結果的可重復性極大程度的取決于操作程序，請嚴格按照要求操作9.1.7為避免交叉污染，每個標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣9.1.8加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內表面9.2分析步驟9.2.1預先進行編號，標記B0、標準品和樣品的位置，推薦進行雙孔檢測9.2.2取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（20×）稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)9.2.4在B0孔中加入50μl0.0n
7、g/ml標準品溶液9.2.5在各標準孔中加入50μl的標準品溶液9.2.6在各樣品孔中加入50μl樣品溶液9.2.7在所有孔中加入50μl的抗呋喃妥因(ADH)抗體酶結合物9.2.8輕輕晃動反應板幾秒鐘。9.337℃溫浴30min（溫浴過程中不時輕拍反應板，可以減少雙孔誤差）9.3.1甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，最后一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液3體。9.4反應9.4.1洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50μl顯色液A，再加50μl顯色液B；輕微晃動反應板使之徹底混勻9.4.237℃溫浴10min9.4.3
