ttc根系活力測定方法

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1、TTC溶液的配制：取3gTTC溶于1L蒸餾水或冷開水中，配制成01％的TTC溶液。藥液PH應(yīng)在65～75，以PH試紙試之(如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水)?！痉椒ā?將玉米、小麥等作物的新種子、陳種子或死種子，用溫水(30℃)浸泡2～6H，使種子充分吸脹。2隨機(jī)取種子2份，每份50粒，沿種胚中央準(zhǔn)確切開，取每粒種子的一半備用。3把切好的種子分別放在培養(yǎng)皿中，加TTC溶液，以浸沒種子為度。4放入30～35℃的恒溫箱內(nèi)保溫30Min。也可在20℃左右的室溫下放置40～60Min。5保溫后，傾出

2、藥液，用自來水沖洗2～3次，立即觀察種胚著色情況，判斷種子有無生活力植物根系活力的測定（TTC法）一、原理??氯化三苯基四氮唑（TTC）是標(biāo)準(zhǔn)氧化電位為80mV的氧化還原色素，溶于水中成為無色溶液，但還原后即生成紅色而不溶于水的三苯甲（TTF），如下式：生成的三苯甲（TTF）比較穩(wěn)定，不會被空氣中的氧自動氧化，所以TTC被廣泛用作酶試驗(yàn)的氫受體，植物根系中脫氫酶所引起的TTC還原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、蘋果酸得到增強(qiáng)，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC還原量能表示脫氫酶活性，并作為根系活力的指標(biāo)。??二、實(shí)驗(yàn)材料

3、、試劑與儀器設(shè)備??（一）實(shí)驗(yàn)材料??水培或砂培小麥、玉米等植物根系。??（二）試劑1.乙酸乙酯（分析純）。2.次硫酸鈉（Na2S2O4，分析純），粉末。3.1％TTC溶液：準(zhǔn)確稱取TTC1.0g，溶于少量水中，定容到100mL。用時稀釋至需要的濃度。4.磷酸緩沖液（1/15mol/L，pH7.0）。5.1mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的濃硫酸55mL，邊攪拌邊加入盛有500mL蒸餾水的燒杯中，冷卻后稀釋至1000mL。6.0.4mol/L琥珀酸：稱取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100mL即成。??（三）儀

4、器設(shè)備??小燒杯3個，研缽1個，移液管：0.5mL1支、10mL1支、5mL3支，刻度試管6支，分光光度計，分析天平（感量0.1mg），電子頂載天平（感量0.1g），溫箱，試管架，藥勺，石英砂適量，濾紙。??三、實(shí)驗(yàn)步驟??1.定性測定??（1）配制反應(yīng)液??把1％TTC溶液、0.4mol／L的琥珀酸和磷酸緩沖液按1:5:4比例混合。??（2）把根仔細(xì)洗凈，把地上部分從莖基部切除。將根放入三角瓶中，倒入反應(yīng)液，以浸沒根為度，置37℃左右暗處放1～3h，以觀察著色情況，新根尖端幾毫米以及細(xì)側(cè)根都明顯地變成紅色，表明該處有

5、脫氫酶存在。??2.定量測定??（1）TTC標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作??取0.4％TTC溶液0.2mL放入大試管中，加9.8mL乙酸乙酯，再加少許Na2S2O4粉末搖勻，則立即產(chǎn)生紅色的TTF。此溶液濃度為每毫升含有TTF80μg。分別取此溶液0.25mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL置10mL刻度試管中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF20μg、40μg、80μg、120μg、160μg的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，以乙酸乙酯作參比，在485nm波長下測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。??（2）稱取根尖樣品0.5g，放

6、入小燒杯中，加入0.4％TTC溶液和磷酸緩沖液（pH7.0）各5mL，使根充分浸沒在溶液內(nèi)，在37℃下暗保溫1～2h，此后立即加入1mol/L硫酸2mL，以停止反應(yīng)。（與此同時做一空白實(shí)驗(yàn)，先加硫酸，再加根樣品，37℃下暗保溫后不加硫酸，其溶液濃度、操作步驟同上）。??（3）把根取出，用濾紙吸干水分，放入研缽中，加乙酸乙酯3～4mL，充分研磨，以提出TTF。把紅色提取液移入刻度試管，并用少量乙酸乙酯把殘渣洗滌2～3次，皆移入刻度試管，最后加乙酸乙酯使總量為10mL，用分光光度計在波長485nm下比色，以空白試驗(yàn)作參比測

7、出吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可求出TTC還原量。??四、結(jié)果計算根系活力=C/(1000*W*h)[mgTTF/（g?h）]式中：C——四氮唑還原量，μg。W——根重，g。????h——時間，h。