葉綠素a檢測(cè)指導(dǎo)

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葉綠素a檢測(cè)指導(dǎo)1.試劑及其配制1.1丙酮溶液（9+1）：量取900mL丙酮（CH3COCH3）與100mL水混合，保存在棕色試劑瓶中。1.2碳酸鎂懸浮液（10g/L）：稱取1g碳酸鎂（MgCO3），加水至100mL，攪勻，盛試劑瓶中待用，用時(shí)需搖勻。1.3硅膠2.測(cè)定步驟2.1樣品制備量取2L～5L海水樣品，加入3mL，碳酸鎂懸浮液，混勻，用玻璃纖維濾膜（WharmanGF/C，Φ0.47mm）或0.445um的纖維素酯微孔濾膜過濾，過濾負(fù)壓不應(yīng)超過50kPa。2.2樣品的提取將過濾了的樣品濾膜放入具塞離心管，加10mL丙酮溶液,搖蕩，放置冰箱貯存室中14h～24h，提取葉綠素-a。若濾得樣品不能及時(shí)提取，應(yīng)將該濾膜抽干、對(duì)折，再套上一張濾紙，置于裝有硅膠的干燥器內(nèi)，貯存在低于1℃的冰箱中。2.3樣品離心離心速度：（3000～4000）r/min；離心時(shí)間：10min。

13.樣品測(cè)定小心將離心的上清液注入測(cè)定池。用丙酮溶液作參比，分別在750nm、664nm、647nm、630nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光值。其中，750nm處的測(cè)定，用以校正提取的濁度，當(dāng)1cm測(cè)定池光程的吸光值超過0.005時(shí)，提取液應(yīng)重新離心。4.記錄與計(jì)算將測(cè)得數(shù)據(jù)記入測(cè)定記錄表中，分別把在波長(zhǎng)664nm、647nm、630nm上測(cè)的吸光值減去750nm下的吸光值，得到校正后吸光值E664、E647、E630.再按下式計(jì)算葉綠素a、b、c含量。Pchl-a=(11.85E664-1.54E647-0.08E630)×v/V·LPchl-b=(21.03E647-5.43E664-2.66E630)×v/V·LPchl-c=(24.52E630-1.67E664-7.60E647)×v/V·L式中：Pchl-a——樣品中葉綠素a含量，單位為微克每升（ug/L）；Pchl-b——樣品中葉綠素b含量，單位為微克每升（ug/L）；Pchl-c——樣品中葉綠素c含量，單位為微克每升（ug/L）；v——樣品提取液體積，單位為毫升（mL)；V——海水樣品實(shí)際用量，單位為升（L）；L——測(cè)定池光程，單位為厘米（cm）。