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第四章藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證⊙定量分析樣品前處理方法⊙定量分析方法特點(diǎn)⊙藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證
1一、定量分析樣品前處理方法Pretreatmentofsampleusedinquantitativeanalysis概述定量分析樣品前處理方法
2泛影酸碘番酸磺溴酞鈉三氯叔丁醇碘苯酯
3含金屬有機(jī)藥物酒石酸銻鉀富馬酸亞鐵卡巴胂金屬有機(jī)藥物
4定量分析樣品前處理方法＊不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法直接測(cè)定法經(jīng)水解后測(cè)定法直接回流后測(cè)定法硫酸水解后測(cè)定法經(jīng)氧化還原后測(cè)定法堿性還原后測(cè)定法酸性還原后測(cè)定法利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測(cè)定含量
5＊經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法濕法破壞HNO3-HClO4HNO3-H2SO4H2SO4-MSO4干法破壞氧瓶燃燒法
6空心A.燃燒瓶B.鉑絲網(wǎng)C.D.盛固體樣品濾紙及其折疊法E.F.G.稱取液體樣品方法7mm50mm30mm尾部7mm13mm20mm25mm35?6mm16?6mm濾紙濾紙AGFEDCB氧瓶燃燒裝置及稱樣方法
7氧瓶燃燒法樣品吸收液測(cè)定方法含氟有機(jī)藥物H2OpH4.3HAc-NaAcBuffer茜素氟藍(lán)分光光度法含氯有機(jī)藥物NaOH溶液銀量法汞量法分光法含溴有機(jī)藥物H2O2-NaOH液或NaOH液-銀量法分光法硫酸肼飽和液含碘有機(jī)藥物NaOH液-銀量法碘量法硫酸肼飽和液汞量法分光法
8碘苯酯含量測(cè)定取本品約20mg，精密稱定，照氧瓶燃燒法進(jìn)行有機(jī)破壞，用NaOHT.S.2ml與H2O10ml為吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液10ml，密塞，振搖放置數(shù)分鐘，加甲酸約1ml，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約3~5min，以除去剩余的溴蒸氣，加KI2g，密塞，搖勻，用Na2S2O3液(0.02mol/L)滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml的硫代鈉液(0.02mol/L)相當(dāng)于1.388mg的C19H29IO2C19H29IO2分子量為416.34
9二、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則緩釋、控釋制劑指導(dǎo)原則微囊、微球與脂質(zhì)體制劑指導(dǎo)原則細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則
10第三節(jié)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證目的：證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求效能指標(biāo)：評(píng)價(jià)分析方法的尺度效能指標(biāo)包括:精密度,準(zhǔn)確度,檢測(cè)限,定量限,選擇性,線性與范圍,耐用性
11(1)準(zhǔn)確度（accuracy）：測(cè)量值與真實(shí)值接近的程度表示:回收率測(cè)定方法：回收試驗(yàn)加樣回收試驗(yàn)
12(2)精密度（precision）：定義:同一樣品多次測(cè)量值之間相互接近的程度表示：標(biāo)準(zhǔn)偏差(s),相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)重復(fù)性:同一實(shí)驗(yàn)室,同一人多次測(cè)定的精密度中間精密度:同一實(shí)驗(yàn)室，不同人，不同儀器測(cè)定的精密度重現(xiàn)性:不同實(shí)驗(yàn)室，不同人測(cè)定的精密度
13(3)專屬性（specificity）指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性)。
14(4)檢測(cè)限（limitofdetection，LOD）：藥物能被檢出的最低濃度(μg/ml)測(cè)定:信噪比法(S:N=3:1)(5)定量限（1imitofquantitation，LOQ）：藥物能被定量測(cè)出的最低濃度(μg/ml)測(cè)定:信噪比法(S:N=10:1)
15(6)線性與范圍（linearityandrange）：待測(cè)物濃度與響應(yīng)值成線性關(guān)系的濃度范圍線性關(guān)系：Y=a+bx（r=0.9999)線性程度：相關(guān)系數(shù)(7)耐用性（robustness）:測(cè)定條件稍有變動(dòng)時(shí)，對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響程度影響因素：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性，流動(dòng)相的組成和pH，商品柱的品牌，柱溫等
16檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容項(xiàng)目?jī)?nèi)容鑒別雜質(zhì)測(cè)定含量測(cè)定及溶出量測(cè)定定量限度準(zhǔn)確度＋＋精密度－＋重復(fù)性＋＋中間精密度＋①＋①專屬性②＋＋＋＋檢測(cè)限－③＋－定量限＋－線性＋＋范圍＋＋耐用性＋＋＋①已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度②如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補(bǔ)充③視具體情況予以驗(yàn)證
17第四節(jié)、生物樣品分析的基本步驟1.藥物從蛋白結(jié)合或綴合物中釋出⑴蛋白變性：如應(yīng)用三氯醋酸、HClO4、有機(jī)溶劑(乙醇、丙酮、乙腈)使蛋白沉淀⑵鹽酸水解⑶酶消化法：最常使用蛋白水解酶中枯草菌溶素(一種細(xì)菌性蛋白分解酶，可在pH7.0~11.0使肽鍵降解)
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19樣品固相凈化及反相高效液相色譜法測(cè)定血漿中茶堿血漿樣品0.5ml+0.8ml內(nèi)標(biāo)液(0.01mg/ml咖啡因)+2ml甲醇上清液加于2gAl2O3柱，用甲醇洗脫收集洗脫液用空氣流揮干殘?jiān)?0.0μl流動(dòng)相溶解上清液10μl進(jìn)樣伍朝筼等藥學(xué)學(xué)報(bào),1989,24(10):769~773旋渦振蕩0.5′離心15′(3000r/min)離心6′17000r/min
20血漿樣品凈化后空白血漿凈化前空白血漿ColumnZorbaxC185μm2.5cm?4.6mm254nmPrecolumnYWG-ODS9-11μm5?4.6mmMobilePhase:甲醇-醋酸鈉(0.05mol/LpH3.0)50?5012840min茶堿咖啡因12840min12840min
2150100150200252015105茶堿(μg/ml)(min)·······················五例病人血漿茶堿濃度測(cè)定6.412.819.225.63232.41.81.20.60茶堿(μg/ml)·····標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=9.566?10-2X+6.153?10-3r=0.9995
