DB1304∕T 417-2022 噬菌體防控雞源沙門菌技術(shù)規(guī)程(邯鄲市).pdf

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ICSDB1304邯鄲市地方標(biāo)準(zhǔn)DB1304/T417—2022噬菌體防控雞源沙門菌技術(shù)規(guī)程2022-12-29發(fā)布2022-12-30實(shí)施邯鄲市市場監(jiān)督管理局發(fā)布 DB1304/T417—2022前言本文件按照GB/T1.1－2020給出的規(guī)則起草。本文件由河北工程大學(xué)提出。本文件起草單位：河北工程大學(xué)、峰峰礦區(qū)市場監(jiān)督管理局。本文件主要起草人：鐘翠紅、馬金波、張彥昌、程瑞、楊利、朱陣、宿欣、袁英、吳麗麗、劉金霞、汲如芬、王海忠、支龍彬。I DB1304/T417—2022噬菌體防控雞源沙門菌技術(shù)規(guī)程1范圍本文件規(guī)定了雞源沙門菌及其噬菌體分離鑒定、噬菌體懸浮液的制備、防控措施等技術(shù)要求。本文件適用于雞源沙門菌的噬菌體預(yù)防和治療。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB4789.4食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)NY/T388畜禽養(yǎng)殖場環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)NY/T541動物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法NY/T555動物產(chǎn)品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌的檢測方法NY/T1948獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全要求通則3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4沙門菌的分離鑒定參照NY/T541采集樣品后，按照GB4789.4-2016分離鑒定沙門菌。5噬菌體混懸液的制備5.1污水采集與處理。從養(yǎng)雞場污水管道采集污水樣品，8000r/min離心15min，取上清液，棄沉淀，經(jīng)0.22μm微孔濾器過濾，濾液備用。5.2噬菌體的分離純化。將鑒定的沙門菌作為誘導(dǎo)菌，利用雙層瓊脂平板法培養(yǎng)噬菌體，挑選大小一致噬菌斑，再利用雙層瓊脂平板法純化培養(yǎng)噬菌體。吸取噬菌體純化液，加至電鏡專用銅網(wǎng)上，用2%醋酸鈾染色，干燥，通過透射電子顯微鏡觀察噬菌體超微結(jié)構(gòu)。再利用雙層瓊脂平板法對具有典型形態(tài)特征的噬菌體進(jìn)行純化。5.3寬譜噬菌體的篩選。將鑒定的沙門菌菌液接種于雙層平板，靜置，再取噬菌體懸液滴于雙層瓊脂平板上，倒置于37℃恒溫箱中，過夜培養(yǎng)，觀察雙層瓊脂平板是否形成噬菌斑，根據(jù)噬菌體吞噬不同種類病原菌菌株的數(shù)量篩選寬譜噬菌體。1 DB1304/T417—20225.4噬菌體混懸液的制備。將0.5mL病原菌噬菌體混懸液加到3mLLB液體培養(yǎng)基后，分別加入100μL同種病原菌菌液，37℃220r/min條件下，置于搖床震蕩培養(yǎng)16h。4℃條件下8000r/min離4心10min，將沉淀再用無菌水懸??；再用0.22μm濾膜過濾懸液。濾液（噬菌體濃度≥1×10PFU/mL）4℃保存。5.5噬菌體混懸液污染狀況檢測。取噬菌體混懸液，均勻涂布于普通營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基，37℃倒置培養(yǎng)24h，觀察培養(yǎng)平板有無菌落生長。若有細(xì)菌菌落生長，應(yīng)重新過濾或制備噬菌體混懸液。6防控6.1雞舍環(huán)境病原菌的凈化。根據(jù)雞源沙門菌的分離鑒定種類制備噬菌體混懸液，按1%比例向新制備沙門菌噬菌體混懸液加水，混勻，用稀釋液噴灑地面及料槽，每周1次。6.2飼養(yǎng)管理。雞舍內(nèi)保持清潔，通風(fēng)良好，符合畜禽養(yǎng)殖場環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求；定期進(jìn)行環(huán)境消毒，及時清除病死雞。7治療7.1消除病原。參照6.1噬菌體混懸液凈化雞舍環(huán)境病原菌。嚴(yán)重病例，可同時配合藥物治療。7.2輔助治療。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，做好乳房衛(wèi)生，提高奶牛抗病力；同時參照6.1.1用消毒液、噬菌體混懸液噴灑雞舍地面和料槽。8生物安全實(shí)驗(yàn)室操作參照NY/T1948獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全要求通則。_________________________________2