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1、GB4143—84牛冷凍精液Frozensemenofbovine1984-01-271984-09-01中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)牛冷凍精液GB4143—84Frozensemenofbovine本標(biāo)準(zhǔn)適用于奶牛、兼用牛、肉牛和黃牛的冷凍精液產(chǎn)品。1規(guī)格與質(zhì)量1.1劑型細(xì)管、顆粒和安瓿。1.2劑量a.細(xì)管：中型0.5毫升；微型0.25毫升。b.顆粒0.1±0.01毫升。c.安瓿0.5毫升。1.3精子活力解凍后活力，指呈直線前進(jìn)運(yùn)動的精子百分率（下限）30％（即0.3）；精子復(fù)蘇率（下限）50％。1.4每一劑量解凍后呈直線前進(jìn)運(yùn)動的精子數(shù)細(xì)
2、管：每支（下限）1000萬個。顆粒：每粒（下限）1200萬個。安瓿：每支（下限）1500萬個。1.5解凍后的精子畸形率（上限）20％。1.6解凍后的精子頂體完整率（下限）40％。1.7解凍后的精液無病原性微生物，每毫升中細(xì)菌菌落數(shù)（上限）1000個。1.8解凍后的精子存活時間在5～8℃貯存時（下限）為12小時；在37℃貯存時（下限）4小時。牛冷凍精液（以下簡稱“凍精”），必須符合上述各項指標(biāo)。否則，不得使用。2制作程序2.1采精2.1.1種公牛的質(zhì)量用于制作凍精的種公牛，其體型外貌和生產(chǎn)性能，均應(yīng)合乎本品種的種用公牛特等、一等標(biāo)準(zhǔn)。在目
3、前尚未建立國營種畜后裔測定站的地區(qū)，主力公牛必須經(jīng)過種畜繁育場，進(jìn)行后裔測定，由省、市、自治區(qū)級畜牧科研部門把關(guān)。未經(jīng)后裔測定的種公牛的凍精，必須經(jīng)過上級主管部門審批，嚴(yán)格控制使用。2.1.2種公牛的體質(zhì)種公牛必須體質(zhì)健壯，新引進(jìn)的公牛，應(yīng)在隔離場所經(jīng)過檢疫。種公牛須經(jīng)正式獸醫(yī)機(jī)構(gòu)和獸醫(yī)師證明，無下列傳染病者，如牛肺疫、布魯氏桿菌病、牛結(jié)核病、牛副結(jié)核病、牛白血病、鉤端螺旋體病、傳染性鼻氣管炎、病毒性腹瀉病、胎兒弧菌病和陰道滴蟲癥等。才允許使用。上述各種疫病的檢查方法，可按中華人民共和國農(nóng)牧漁業(yè)部頒布的有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。2.1.3成年種公牛
4、每周可采精兩次；每次也可根據(jù)具體情況和需要，連續(xù)排精兩回。采精前，應(yīng)先用溫水清洗公牛陰筒和包皮，然后再用滅菌生理鹽水沖洗干凈。2.1.4種公牛的新鮮精液，應(yīng)符合下列質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。不具備其中任何一項者，不得用于制作凍精。a.新鮮精液的色澤應(yīng)呈乳白稍帶黃色。b.直線前進(jìn)運(yùn)動精子（下限）60％。c.精子密度每毫升（下限）6.0億。d.精子畸形率（上限）15％。2.2精液的稀釋2.2.1稀釋保護(hù)劑的配制2.2.1.1配制凍精用的稀釋保護(hù)劑，必須用新鮮的雙重蒸餾水和卵黃，二級品以上的化學(xué)試劑。2.2.1.2所用器具，必須達(dá)到牛冷凍精液人工授精技術(shù)操作
5、規(guī)程的標(biāo)準(zhǔn)，保證清潔、無菌。2.2.1.3推薦下列配方，作為凍精用稀釋保護(hù)劑a.細(xì)管用：第一液蒸餾水100毫升，檸檬酸鈉2.97克，卵黃10毫升。第二液取第一液41.75毫升，加入果糖2.5克，甘油7毫升。脫脂奶82毫升，卵黃10毫升，甘油8毫升。b.顆粒用：12％蔗糖液75毫升，卵黃20毫升，甘油5毫升。12％乳糖液75毫升，卵黃20毫升，甘油5毫升。2.9％檸檬酸鈉液73毫升，卵黃20毫升，甘油7毫升。c.安瓿用：可參照以上各配方酌情使用。上述各類稀釋保護(hù)劑，在每100毫升中，應(yīng)加青霉素、鏈霉素各5～10萬單位。稀釋保護(hù)劑要現(xiàn)配現(xiàn)用
6、；亦可配后放入4～5℃冰箱中備用，但不應(yīng)超過一周。2.2.2稀釋比例不做具體規(guī)定，但必須保證每一劑量（細(xì)管、顆粒、安瓿）中，解凍后所含直線前進(jìn)運(yùn)動精子數(shù)的規(guī)定。2.3降溫和平衡（預(yù)冷）稀釋后的精液，采用逐漸降溫法。在1～1.5小時內(nèi)，使稀釋精液的溫度降到4～5℃；然后再在同溫的恒溫容器內(nèi)平衡2～4小時。2.4冷凍2.4.1制備凍精的操作室，應(yīng)符合牛人工授精技術(shù)操作規(guī)程。2.4.2凍精的器具2.4.2.1細(xì)管凍精，應(yīng)采用與細(xì)管配套的器具進(jìn)行。2.4.2.2顆粒凍精，采用聚四氟乙烯板（簡稱氟板）、銅紗網(wǎng)、尼龍網(wǎng)或鋁板均可。2.4.2.3安瓿
7、凍精，采用凈容量為0.5毫升的硅酸鹽中性玻璃安瓿。以上各種用具，在凍精時，精液容器與液氮面的距離，一般保持1～1.5厘米，初凍溫度-80～-120℃。精液在冷凍前，應(yīng)充分混勻，并檢查精子活力。細(xì)管精液，不論是用聚乙烯醇封口、鋼珠封口，還是超聲波塑料熱合，都必須將口封嚴(yán)。顆粒精液，每毫升稀釋精液，滴凍10±1粒，滴管應(yīng)事先預(yù)冷。操作要準(zhǔn)確、規(guī)整，每凍完一頭公牛精液之后，必須更換滴管、氟板等用具。安瓿精液，用酒精噴燈火焰封口。在制作凍精時，不論是細(xì)管、顆粒和安瓿，均應(yīng)始終注意防止精液溫度回升。每凍完一批（頭）精液，應(yīng)立即放入液氮中浸泡，然后
8、計數(shù)，取樣檢查和包裝。3檢查方法3.1精子活力檢查3.1.1顆粒凍精，應(yīng)先取2.9％二水檸檬酸鈉液1～1.5毫升，加溫到38±2℃，投放凍精一粒，輕輕搖蕩，使之迅速溶化，用壓片法，立即在顯微鏡下檢查。3.1
