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《兩種膠濃度pcr_dgge方法對不同處理羊糞低溫沼氣發(fā)酵優(yōu)勢細菌結構多樣性的分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、中國沼氣ChinaBiogas2014，32(6)9兩種膠濃度PCＲ-DGGE方法對不同處理羊糞低溫沼氣發(fā)酵優(yōu)勢細菌結構多樣性的分析馮蕾，陳競，代金平，楊新平，古麗·艾合買提(新疆農科院微生物應用研究所新疆特殊環(huán)境微生物實驗室，烏魯木齊830091)摘要:利用PCＲ-DGGE方法分析不同菌劑處理對羊糞沼氣發(fā)酵微生物種群多樣性的影響，了解低溫條件下(15℃)羊糞沼氣發(fā)酵過程中優(yōu)勢細菌群落結構多樣性變化規(guī)律，從而為北方地區(qū)冬季低溫沼氣發(fā)酵促進菌劑的篩選奠定理論基礎。通過對不同發(fā)酵處理的羊糞沼氣反應器中取樣，采用溶菌酶法，分別進行沼液中總DNA的提取，總DNA經純化后采用引物34
2、1F-GC和518Ｒ進行細菌16SrDNA基因V3區(qū)PCＲ擴增，擴增產物進行兩種膠濃度變性梯度凝膠電泳(DGGE)分離并回收優(yōu)勢條帶和變化明顯的條帶進行擴增、測序及系統(tǒng)進化樹的繪制，分析其細菌結構多樣性。序列比對的結果表明，羊糞沼氣反應器中的優(yōu)勢細菌菌群為:回收的44條帶中擬桿菌門(Bacte-roidetes)占32%，變形菌門(Proteobacteria)占30%，厚壁菌門(Firmicutes)占36%。其中，在15℃條件下，反應器中細菌優(yōu)勢基因片段更為豐富均勻，存在相對穩(wěn)定的優(yōu)勢種群，且各處理的優(yōu)勢菌的豐度比對照組中相應菌的豐度更強，存在差異條帶，細菌種群變化明顯
3、，優(yōu)勢種群亦有所不同，主要有Clostridiumsp．，Proteiniphilumsp．，Bacteroid-alesbacterium，Pseudomonassp，Advenellasp．等，其中低溫下菌劑處理的以梭菌屬菌(Clostridium)表現(xiàn)有較高的豐度;而在30℃條件下，主要有Bacteroidalesbacterium，Hydrogenophagasp．，Pseudomonassp，Clostridialesbacterium等，其中以噬氫菌屬(Hydrogenophaga)Hydrogenophagasp．表現(xiàn)有較高的豐度，條帶多樣性數量比15℃的要少
4、，添加菌劑處理對細菌種群變化影響不明顯。關鍵詞:低溫沼氣;發(fā)酵;微生物種群;多樣性;PCＲ-DGGE中圖分類號:X713;S216．4文獻標志碼:A文章編號:1000－1166(2014)06－0009－07AnalysisonDiversityofBacterialCommunityinLowTemperatureSheepManureBiogasFermentationSystemU-singTwoGelConcentrationPCＲ-DGGEMethod/FENGLei，CHENJin，DAIJin-ping，YANGXin-ping，GuliAihemaiti/(
5、MicrobiologyInstituteofXinjiangAcademyofAgriculturalSciences，XinjiangLaboratoryofSpecialEnviromentalMicrobiology，Urumqi830091，China)Abstract:Sheepmanurebiogasfermentationunderlowtemperatue(15℃)wastreatedwithdifferentbacteriaagent，andbacteriadiversitywasanalyzedbymethodoftwogelconcentration
6、PCＲ-DGGE．Takingthesamplesfromdifferenttreatedsheepmanurebiogasfermentationreactors，andthetotalDNAinbiogasslurrywereextractedbylysozymemethod．Afterpurification，thetotalDNAwereprocessedfor16SrDNAPCＲamplificationbyprimers341F-GCand518Ｒ．TheamplifiedproductswereseparatedbyPCＲ-DGGEmethodwithtwol
7、evelgelconcentration，anddominantbandswererecoveredforamplifing，sequencingandbacterialdiversityanalyzing．Theresultsshowedthatthedominantbacteriainsheepmanurebio-gasreactorwereBacteroideteswhichaccountedfor32%oftotallyrecovered44bands，Proteobacteriaaccountedfor3
