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1、2014年6月甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)第49卷第3期130~133JOURNALOFGANSUAGRICULTURALUNIVERSITY雙月刊嗜熱脂肪芽孢桿菌普魯蘭酶酶學(xué)性質(zhì)研究趙淑琴,楊孝樸,劉霞,楊學(xué)山(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院,甘肅蘭州730070)摘要:對(duì)獲得的嗜熱脂肪芽孢桿菌普魯蘭酶進(jìn)行了酶學(xué)性質(zhì)測(cè)定.結(jié)果表明:普魯蘭酶最適溫度為60℃,此溫度下處理90min,殘存酶活在70%以上,70℃酶的半衰期大于50min;最適pH5.6,在pH4.5~6.0的范圍50℃保溫24h仍具有較高活性;K為0.036μmol/L,V為20.16μmol/min;Mn2
2、+、Mg2+和Ca2+對(duì)酶有激活作用,其mmax中以Mn2+的激活作用最強(qiáng),而Cu2+和Zn2+則有抑制作用.研究表明嗜熱脂肪芽孢桿菌普魯蘭酶是高溫酸性酶,對(duì)底物有較強(qiáng)親合力和催化活性,在淀粉糖化工業(yè)中有良好的應(yīng)用前景.關(guān)鍵詞:嗜熱脂肪芽孢桿菌;普魯蘭酶;酶學(xué)性質(zhì)中圖分類號(hào):TS235.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A文章編號(hào):1003-4315(2014)03-0130-04DOI:10.13432/j.cnki.jgsau.2014.03.023EnzymaticpropertiesofpullulanasefromBacillusstearothermophilusZH
3、AOShu-qin,YANGXiao-pu,LIUXia,YANGXue-shan(CollegeofLifeScienceandTechnology,GansuAgriculturalUniversity,Lanzhou730070,China)Abstract:AstudywasconductedontheenzymaticpropertiesofpullulanasewhichobtainedfromBacillusstearothermophilus.Theresultsshowedthattheoptimumtemperaturewas60℃,ab
4、out70%ofre-sidualactivitywasstillsustainedaftertreatmentfor90minat60℃.Thehalf-lifewaslongerthan50minat70℃.OptimumpHwas5.6.TheenzymekeptahigheractivityintherangeofpH4.5to6.0for24hat2+,Mg2+2+50℃.Kmwas0.036μmol/L,Vmaxwas20.16μmol/min;MnandCaactivatedtheenzymeactivi-2+2+2+ty,amongthemMn
5、hadthemostactivation.CuandZninhibitedtheenzymeactivity.ItissuggestedthatthepullulanaseobtainedfromB.stearothermophilusbelongstohigh-temperatureacidicenzymes,canbeusedinstarchprocessingindustry.Keywords:Bacillusstearothermophilus;pullulanase;enzymaticproperties[1]工業(yè)上使用的谷類淀粉是由直鏈淀粉和支鏈淀
6、少類似的具有相同功能的新酶.我國(guó)早在20世紀(jì)粉構(gòu)成,且支鏈淀粉一般占75%~85%.支鏈淀粉70年代就篩選到了產(chǎn)普魯蘭酶的菌株,但由于該菌中除主要的α-1,4糖苷鍵外,還有5%~6%存在于株所產(chǎn)的普魯蘭酶最適pH為5.5~6.0,與糖化酶分支點(diǎn)的α-1,6糖苷鍵.淀粉工業(yè)上常用的α-淀粉的最適pH不符,且在pH<5時(shí)易失活,所以沒有[2]酶和β-淀粉酶,只作用淀粉中α-1,4糖苷鍵,對(duì)α-1,得到廣泛應(yīng)用.為了改變這一現(xiàn)狀,本研究對(duì)嗜熱6糖苷鍵不起作用,不利于淀粉的充分利用.1961脂肪芽孢桿菌(Geobacillusstearothermophilus)中年
7、Bender和Wallenfals首次在Aerobacteraero-的普魯蘭酶(Pullulanase)經(jīng)分離純化、電泳檢查后,genes中發(fā)現(xiàn)普魯蘭酶,由于該酶具有切割α-1,6糖對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究,主要包括最適溫度、最適苷鍵的作用而倍受關(guān)注.國(guó)外作了大量研究,發(fā)現(xiàn)不pH值、熱穩(wěn)定性、酸穩(wěn)定性、金屬離子依賴性和酶第一作者:趙淑琴(1985-),女,助教,碩士研究生,研究方向動(dòng)物生物化學(xué).Email:zsq502802@126.com收稿日期:2013-06-27;修回日期:2013-09-05第3期趙淑琴等:嗜熱脂肪芽孢桿菌普魯蘭酶酶學(xué)性質(zhì)研究131促反
8、應(yīng)動(dòng)力學(xué)常數(shù)等,旨在為該酶在生產(chǎn)實(shí)踐中