大豆根腐病多種病原菌的分子檢測(cè)及復(fù)合侵染規(guī)律研究

大豆根腐病多種病原菌的分子檢測(cè)及復(fù)合侵染規(guī)律研究

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1、分類(lèi)號(hào):S432學(xué)校代碼:10758密級(jí):公開(kāi)學(xué)號(hào):08020035碩士學(xué)位論文大豆根腐病多種病原菌的分子檢測(cè)及復(fù)合侵染規(guī)律研究StudyonMoleculeDetectionandCompositeInfectionRegularityAimattheMultiple-pathogensofSoybeanRootRot研究生姓名鄭培娥導(dǎo)師姓名及職稱(chēng)郭慶元教授學(xué)位門(mén)類(lèi)級(jí)別農(nóng)學(xué)碩士專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)植物病理學(xué)研究方向真菌病害所在學(xué)院農(nóng)學(xué)院新疆·烏魯木齊二○一二年六月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知,除了文中特別加

2、以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果,也不包含為獲得新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育單位的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研究生簽名:時(shí)間:年月日關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說(shuō)明本人完全了解新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即:新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子文檔,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文,允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索,可以公布(包括刊登)論文

3、的全部或部分內(nèi)容。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)研究生簽名:時(shí)間:年月日導(dǎo)師簽名:時(shí)間:年月日本文是教育部留學(xué)回國(guó)人員科研啟動(dòng)基金項(xiàng)目“大豆根腐病多病原的分子判別及復(fù)合侵染規(guī)律研究”的部分研究成果(項(xiàng)目編號(hào):20091001)課題主持人:郭慶元教授(新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院)大豆根腐病多種病原菌的分子檢測(cè)及復(fù)合侵染規(guī)律研究摘要大豆根腐?。⊿oybeanRootRot)是一種世界性的病害,是新疆大豆生產(chǎn)上發(fā)生最普遍、危害最突出的嚴(yán)重病害之一。已有的研究表明大豆根腐病是一種多病原復(fù)合侵染的病害,因其土傳、多病原復(fù)合侵染和初期癥狀隱蔽等特點(diǎn)而被普遍認(rèn)為是一類(lèi)較難

4、防治的病害。為了深入分析該病復(fù)合侵染規(guī)律,本研究采用ITS區(qū)段基因序列比對(duì)方法對(duì)該病的七種致病菌進(jìn)行了分子驗(yàn)證;采用常規(guī)生物學(xué)方法對(duì)病原菌生物學(xué)特性進(jìn)行了研究;采用多病原交叉接種方法對(duì)主要病原菌的致病作用進(jìn)行了分析;并采用特異性引物分子標(biāo)記方法建立了該病病原菌的分子標(biāo)記體系和主要病原菌在植株上的消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)的分子檢測(cè)方法;并將分子動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)分離監(jiān)測(cè)結(jié)果相比較,對(duì)大豆根腐病復(fù)合侵染規(guī)律進(jìn)行了分析?;亟幼C病實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:尖孢鐮孢霉(Fusarumoxysporum)、茄腐鐮孢霉(Fusarumsolani)、禾谷鐮孢霉(Fusarumgraminearum.

5、)、茄腐鐮孢霉藍(lán)色變種(Fusarumsolanivar.coeruleum)、燕麥鐮孢霉(Fusarumavenum)、立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)和瓜果腐霉菌(Pythiumaphanidenatum)均為大豆根腐病致病菌。其中尖孢鐮孢霉(Fusarumoxysporum)、立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)、瓜果腐霉菌(Pythiumaphanidenatum)為致病性較強(qiáng)的主要致病菌。序列比對(duì)結(jié)果使七種大豆根腐病致病菌中6種病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果得到分子驗(yàn)證。七種病原菌主要生物學(xué)特性研究表明:立枯絲核菌(Rhizoc

6、toniasolani)、瓜果腐霉菌(Pythiumaphanidenatum)、尖孢鐮孢霉(Fusarumoxysporum)適宜生長(zhǎng)溫度(20~30℃)和最適溫度(25℃)基本一致;立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)適宜在中性偏酸及黑暗條件下生長(zhǎng),瓜果腐霉菌(Pythiumaphanidenatum)適宜在酸性至中性及光照條件下生長(zhǎng),尖孢鐮孢霉(Fusarumoxysporum)適宜在弱酸至堿性及12h光暗交替條件下生長(zhǎng)。交叉接種研究初步證明了立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)在復(fù)合致病過(guò)程中的先導(dǎo)作用。采用六種針對(duì)各病原菌種

7、的特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)均有特異性條帶;經(jīng)擴(kuò)增體系優(yōu)化和靈敏度檢測(cè),初步建立了針對(duì)大豆根腐病多種病原菌的分子標(biāo)記體系。在大豆根腐病發(fā)病盛期對(duì)隨機(jī)采樣的30株大豆植株的檢測(cè)結(jié)果顯示:鐮孢霉(Fusariumspp.)的檢出率為70.0%,立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)的檢出率為10.0%,瓜果腐霉菌(Pythiumaphanidenatum)I的檢出率為6.7%。初步證明了鐮孢霉(Fusariumspp.)在復(fù)合致病過(guò)程中的主導(dǎo)作用。采用傳統(tǒng)分離鑒定和分子檢測(cè)方法對(duì)大豆植株進(jìn)行發(fā)病動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)結(jié)果表明:分子檢測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)分離鑒定結(jié)果基本一致。整個(gè)

8、生育期鐮孢霉(Fusariumspp.)的分離比率最

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