茶樹(shù)亞硝酸還原酶基因csnir的克隆及表達(dá)分析

《茶樹(shù)亞硝酸還原酶基因csnir的克隆及表達(dá)分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、園藝學(xué)報(bào)，2016，43(7)：1348–1356.ActaHorticulturaeSinica1348doi：10.16420/j.issn.0513-353x.2016-0324；http：//www.ahs.ac.cn茶樹(shù)亞硝酸還原酶基因CsNiR的克隆及表達(dá)分析*張芬，王麗鴛，成浩，韋康，胡娟，張成才，劉圓，吳立赟，李海琳（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所，國(guó)家茶樹(shù)改良中心，杭州310008）摘要：以‘龍井43’茶樹(shù)葉片的cDNA為模板，利用RTPCR技術(shù)克隆了茶樹(shù)亞硝酸還原酶基因（CsNiR），得到完整的ORF全長(zhǎng)為1764bp，編碼

2、587個(gè)氨基酸；所推導(dǎo)的氨基酸序列與垂枝樺（Betulapendula）、擬南芥（Arabidopsisthaliana）、菠菜（Spinaciaoleracea）和水稻（Oryzasativa）的同源性均大于76%。生物信息學(xué)分析表明，CsNiR分子量為68.648kD，等電點(diǎn)為6.12，為親水性的非分泌蛋白；二級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)顯示，CsNiR具有完整的NiR蛋白結(jié)構(gòu)，含血紅素蛋白β–化合物區(qū)域和4Fe-4S區(qū)域。實(shí)時(shí)熒光定量結(jié)果表明，該基因在成熟葉片中表達(dá)量高于一芽二葉和根。采用營(yíng)養(yǎng)液水培3個(gè)茶樹(shù)品種，-1在氮饑餓兩周后分別供應(yīng)正常氮素和低

3、氮素（1和0.1mmol·LNH4NO3），qRT-PCR測(cè)定發(fā)現(xiàn)，正常氮素處理的2h和6h，誘導(dǎo)根CsNiR表達(dá)量顯著增加，葉片中的表達(dá)量變化延遲到24h之后，且變化幅度存在基因型之間的差異；低氮處理對(duì)CsNiR表達(dá)量的影響相對(duì)較小。因此，研究CsNiR基因的表達(dá)特性及其在茶樹(shù)氮素利用中所發(fā)揮的作用，需結(jié)合茶樹(shù)基因型、組織部位、供氮水平等進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。關(guān)鍵詞：茶樹(shù)；亞硝酸還原酶；克隆；基因表達(dá)；氮素中圖分類號(hào)：S571.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：0513-353X（2016）07-1348-09MolecularCloningandExp

4、ressionAnalysisofNitriteReductaseGeneCsNiRinTeaPlant*ZHANGFen，WANGLi-yuan，CHENGHao，WEIKang，HUJuan，ZHANGCheng-cai，LIUYuan，WULi-yun，andLIHai-lin（TeaResearchInstitute，theChineseAcademyofAgriculturalSciences，NationalCenterforTeaImprovement，Hangzhou310008，China）Abstract：Teanitr

5、itereductase（CsNiR）wasclonedbyRT-PCRfromcDNAisolatedfromleavesofcultivar‘Longjing43’.ThecompleteORFoftheCsNiRwas1764bpencoding587aminoacids.AlignmentofaminoacidsequencesshowedthatCsNiRsharingmorethan76%similaritiestoNiRinBetulapendula，Arabidopsisthaliana，Spinaciaoleraceaan

6、dOryzasativa.BioinformaticsanalysisindicatedthattheCsNiRwasahydrophilicnon-secretoryproteinwithmolecularweight68.648kDandtheoreticalpI6.12.PredictionresultsbyInterProScanshowedthesecondarystructureofCsNiRproteincomprisedofahemoproteinbetacomponentanda4Fe-4Sregion，andits3Ds

7、tructurewasalsopredicted收稿日期：2016–05–26；修回日期：2016–07–05基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31570695）；國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金項(xiàng)目（CARS-23）；浙江省農(nóng)業(yè)新品種選育重點(diǎn)專項(xiàng)（2012C2905-4）*通信作者Authorforcorrespondence（E-mail：chenghao@tricaas.com）張芬，王麗鴛，成浩，韋康，胡娟，張成才，劉圓，吳立赟，李海琳.茶樹(shù)亞硝酸還原酶基因CsNiR的克隆及表達(dá)分析.園藝學(xué)報(bào)，2016，43(7)：1348–13

8、56.1349bySwissModel.qRT-PCRanalysisrevealedthattheexpressionabundanceofCsNiRinmatureleave