論外用中藥對兔耳增生性瘢痕攣縮的抑制作用

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1、論外用中藥對兔耳增生性瘢痕攣縮的抑制作用摘要:目的觀察一種防治瘢痕的外用復(fù)方中藥瘢痕膏對兔耳增生性瘢痕攣縮的抑制作用。方法選用8只新西蘭大耳白兔建立兔耳增生性瘢痕動物模型。實驗組于創(chuàng)面上皮化時即開始用瘢痕膏，并設(shè)立空白對照。用藥后第30天及第100天觀察兩組瘢痕組織的外觀形態(tài)，應(yīng)用ABC免疫組織化學(xué)法染色測α平滑肌肌動蛋白（αSMA），利用計算機輔助病理圖象分析系統(tǒng)測定并紀(jì)錄每張切片陽性反應(yīng)區(qū)域的平均面積百分比和光密度值。結(jié)果實驗組瘢痕反應(yīng)較輕，免疫組化染色瘢痕膏組兔耳瘢痕組織αSMA平均面積百分比和光密度值明顯低于對照組（P&

2、lt;0.05）。結(jié)論用復(fù)方中藥對兔耳增生性瘢痕攣縮有抑制作用，對增生性瘢痕有防治作用。關(guān)鍵詞:增生性瘢痕疾病模型α平滑肌肌動蛋白Abstract:ObjectiveToobservetheeffectofapoundtraditionalChinesemedicineointmentonthepreventionofrabbitearshypertrophicscar.MethodsEightNeentanimals.Theointmentbegantobeusedintheexperimentalgrouporphologyoot

3、hmuscleactin(αSMA)munohistochemicalstaining.puter-aidedimageanalysissystemineandrecordthepercentageofpositiveregionandtheopticaldensityineachslice.ResultsThepercentageofαSMApositiveregionandtheopticaldensityintheexperimentalgrouparebothsignificantlyloentcaninhibittheh

4、ypertrophicscarcontractureandpreventhypertrophicscarsofrabbitears.Keyodel；α-smoothmuscleactin　　增生性瘢痕是創(chuàng)傷過度愈合的結(jié)果，后期的瘢痕攣縮嚴(yán)重影響了肢體功能。防治增生性瘢痕的方法很多，如外科手術(shù)、加壓、放射、激光、冷凍和藥物瘢痕內(nèi)注射等療法，但療效均不十分理想。傳統(tǒng)中醫(yī)藥對瘢痕的治療積累了豐富的經(jīng)驗，且有較顯著的療效。本課題組根據(jù)驗方進行改進的瘢痕膏，通過應(yīng)用于兔耳腹面瘢痕模型，觀察該藥對兔耳增生性瘢痕攣縮的影響，探討瘢痕膏對增生性瘢痕防

5、治作用的可能機制，為其臨床使用提供理論和實踐依據(jù)。1器材　1.1動物　　實驗在中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院整形外科中心實驗室完成。選用新西蘭大耳白兔8只，清潔級，兔齡3～4個月，雌雄不拘，體重（2.0±0.2）kg，由中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供［許可證號：SCXK（軍）2002-005］。飼養(yǎng)室溫度18～22℃，相對濕度60%～75%，人工混合飼料喂養(yǎng)?！?.2藥品及試劑　　瘢痕膏，一種外用復(fù)方中藥制劑，由廣西醫(yī)科大學(xué)藥廠提供。其主要成分為丹參酮、積雪苷、黃芩苷、甘草酸、苦參堿等，按3∶3∶2∶2∶1的比例加基質(zhì)

6、制作而成。aSMA鼠抗人單克隆抗體，北京中杉金橋技術(shù)有限公司提供，貨號ZM003。ABC試劑，武漢博士德生物技術(shù)有限公司提供，貨號SA1020。HRPDAB底物顯色試劑盒，北京TIANGEN技術(shù)有限公司提供，貨號PA109。2方法　　　2.1造模方法　　肌注速眠新（長春農(nóng)牧大學(xué)獸醫(yī)研究所生產(chǎn)）將兔麻醉后，于兔耳腹側(cè)沿長軸制作直徑為1cm的圓形創(chuàng)面，每耳6處，每兩處間間隔至少2cm，完整切除全層皮膚，去除軟骨膜，保留軟骨，創(chuàng)面不予任何處理，任其自然愈合。21d左右創(chuàng)面上皮化，無一創(chuàng)面感染不愈或愈合不良?！?.2分組干預(yù)　　隨機將實驗

7、動物分別設(shè)為瘢痕膏組（瘢痕組織涂抹瘢痕膏干預(yù)）和對照組（空白對照），每組8只兔耳，48個創(chuàng)面。瘢痕膏組于創(chuàng)面完全上皮化時即20d后開始用藥，將瘢痕膏涂在瘢痕部位，并輕揉直到藥物吸收，3次/d，連續(xù)用藥100d，分別于用藥后第30天，第100天取材，每次每只兔耳隨機取3處。　2.3觀察項目　　2.3.1大體觀察　　觀察對比用藥后瘢痕膏組與對照組瘢痕組織顏色、質(zhì)地的變化。對比分析實驗組與對照組瘢痕發(fā)生率及外觀形態(tài)的差異?！　?.3.2病理切片　　將所取標(biāo)本用4%多聚甲醛固定48h，石蠟包埋切片，每個標(biāo)本切兩張，分別進行HE染色以及ABC法

8、免疫組織化學(xué)染色。鏡下觀察膠原排列情況及α平滑肌肌動蛋白染色情況。每張切片在高倍顯微鏡下（×40）中央?yún)^(qū)與周邊區(qū)隨機選4個視野，應(yīng)用計算機病理圖像分析軟件ImageProPlus6.0分析其陽性面積比例、光密度?！?