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《白首烏粗多糖對酒精性肝損傷的保護(hù)作用研究 》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、白首烏粗多糖對酒精性肝損傷的保護(hù)作用研究：楊小紅，袁江，周遠(yuǎn)明，張瑜，曾亞翎，劉謀治，趙冰清【摘要】目的探討白首烏（耳葉牛皮消CynanchumauriculatumRoyleexethodsInthisexperiment,roughpolysaccharidefromBaiShoualcontrolgroups,modelcontrolgroup,positivecontrolgroupandthreeexperimentgroups.Eachexperimentgrouphad14miceandg/(kg·d),middle
2、-dosageof250mg/(kg·d)andlog/(kg·d),evolumeofphysiologicalsaline.TheconcentrationoftheserumGPT/ALTandGOT/ASTeasuredbyextractingtheeyeballblood.ResultsTheactivityoftheserumGPT/ALTandGOT/ASTintheexperimentgroupdecreasedmoresignificantlythanthatinmodelcontrolgroup,andthed
3、ifferencesCynanchumauriculatumRoyleexice. KeyauriculatumRoyleexauriculatumRoyleex.)Hemsl和戟葉牛皮消CynanchumbungeiDee.的塊根，具有養(yǎng)血益肝、固腎益精、烏須黑發(fā)和延年益壽的功效［1，2］?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)白首烏中含有多種有效成分，具有抗腫瘤、抗衰老和保肝等多方面的藥理活性［1，3］。國外的研究也證實(shí)了這些藥理活性［4～6］?！ ?器材 1.1藥品與試劑 白首烏購自江蘇濱海，經(jīng)湖南省藥檢所方石林教授鑒定為蘿摩科植物耳葉牛皮消C
4、ynanchumauriculatumRoyleexWight，實(shí)驗(yàn)用酒精（AR），谷草轉(zhuǎn)氨酶(ALT)試劑盒(南京建成生物工程研究所)。谷丙轉(zhuǎn)氨酶酶(AST)試劑盒(南京建成生物工程研究所)。氯仿、丙酮、乙醚、正丁醇均為分析純。護(hù)肝片為北京亞東生物制藥有限公司生產(chǎn)。 1.2儀器與設(shè)備 電熱恒溫干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）202－3AB型；電熱恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）DK－98-1A；真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）RE52－99；抽濾機(jī)（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）SHB－B95型；離心沉淀機(jī)（上海醫(yī)用分
5、析儀器廠）LXT－II；分析天平（湘儀天平儀器廠）TG328B?！ ?.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠(長沙市開福區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部提供,動(dòng)物合格證號(hào)：湘000468)?！ ?.4實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理軟件 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均在LENOVO-patiblePC機(jī)Royleexl乙醇(85%),加熱回流1h，過濾，濾渣于恒溫箱中80℃干燥過夜［2］，得淡黃色濾渣52.5g?！ ?.1.2初多糖的提取浸提 將黃色濾渣52.5g均分于兩個(gè)1000ml圓底燒瓶中,A瓶為26.2g，B瓶為26.3g。A、B瓶各加520ml水,在恒溫水浴中回流1h，過濾，濾渣在相
6、同條件下重復(fù)浸提1次，合并濾液?！ ‰x心：將兩次浸液離心機(jī)離心10min(2500r/min)，合并濾液。 減壓濃縮：將合并濾液在真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮至75ml?！ ≌婵崭稍铮涸跐饪s后的多糖溶液中加入3倍量95％乙醇（AR）225ml，抽濾，真空干燥后得淡黃色粗多糖?！ ?.2粗多糖的純化 2.2.1脫蛋白 粗多糖加蒸餾水200ml復(fù)溶后經(jīng)過Sevag試劑(氯仿20ml，正丁醇4ml)除蛋白，連續(xù)操作4次,得150ml多糖溶液?！ ?.2.2醇沉 在脫蛋白后的多糖溶液中加入3倍95％乙醇，沉淀用乙醇洗滌3次，經(jīng)抽濾、真空干
7、燥后得到淺灰色粉末狀結(jié)晶。 2.2.3純化 將灰白色結(jié)晶用乙醇、丙酮及乙醚反復(fù)洗滌，抽濾、真空干燥后得到淺灰色粉末狀結(jié)晶。 2.3多糖的驗(yàn)證 2.3.1多糖檢測反應(yīng) 取多糖粉末少許用蒸餾水溶解，取1ml于試管中，再加10%α-萘酚的乙醇溶液3滴，均勻混合，沿管壁加濃硫酸1ml，使集于下層，在兩層交界面有棕色環(huán)出現(xiàn)，證明此為多糖?！ ?.3.2水解 取上述粉末20mg置錐形瓶內(nèi)，加入2mol／L的硫酸甲醇溶液2ml，封口，置85℃水浴中水解24h，冷卻，用飽和Ba(OH)2中和，離心，取上清液，減壓濃縮至干，待用?！ ?
8、.3.3單糖組分的紙色譜層析 用微量點(diǎn)樣器分別取樣品水解液和標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液各4～5μl，在紙色譜上點(diǎn)樣，置于展開筒中展開，展開系統(tǒng)為:正丁醇∶醋酸∶水(4∶1∶5)上層,自然風(fēng)干后用鄰苯二甲酸苯胺顯色，樣品水解液出現(xiàn)4個(gè)棕色點(diǎn)，如圖1，其中有一個(gè)點(diǎn)
