β淀粉樣蛋白對小膠質(zhì)細胞合成一氧化氮的影響

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1、β淀粉樣蛋白對小膠質(zhì)細胞合成一氧化氮的影響【摘要】目的探討β淀粉樣蛋白(amyloidbetapeptide,Aβ)誘導小膠質(zhì)細胞活化后κ輕鏈核因子(nuclearfactorkappaB,NFκB)的表達及一氧化氮(NO)水平的變化。方法Aβ干預純化培養(yǎng)的小膠質(zhì)細胞，觀察其形態(tài)學變化，采用鎘還原法測定NO水平，免疫細胞化學方法研究NFκB的表達。結果500nmol/L及1000nmol/LAβ干預組細胞形態(tài)呈“阿米巴樣”，細胞核內(nèi)NFκB的表達增加（P＜0.05），培養(yǎng)基中NO濃度升高（P＜0.05）。結

2、論Aβ激活小膠質(zhì)細胞NFκB途徑大量合成NO，可能參與阿爾茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)的致病過程?！娟P鍵詞】β淀粉樣蛋白小膠質(zhì)細胞κ輕鏈核因子一氧化氮阿爾茨海默病【Abstract】ObjectiveTostudythemorphologicalchangesofmicroglialcellactivatedbyamyloidbetapeptide,theexpressionofnuclearfactorkappaBincreasedinnucleusandthelevelsofnit

3、ricoxideinculturalmedium.MethodsPurifiedmicroglialcellsyloidbetapeptideandthemorphologicalchangesiumreductionmethodinethelevelsofnitricoxideinculturemedium,immunocytochemicalmethodtoinvestigatechangesofnuclearfactorkappaB.ResultsThereentalgroupof100nmol/Lamyl

4、oidbetapeptideandthecontrolgroup(P＞0.05).Intheexperimentalgroupsof500nmol/Land1000nmol/Lamyloidbetapeptide,microglialcellsediumthancontrolgroup(P＜0.05).ConclusionTheamyloidbetapeptidecouldparticipateintheprocessesofAlzheimer’sdiseasebyinducingmicroglialcellst

5、oexcretenitricoxide.【Keyyloidbetapeptide，microglialcell，nuclearfactorkappaB，nitricoxide，Alzheimer’sdisease阿爾茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)重要的病理特征之一是纖維狀β淀粉樣蛋白(amyloidbetapeptide,Aβ)在神經(jīng)細胞外及腦血管壁沉積形成老年斑(senileplaques,SP)。大量研究表明，Aβ的沉積在AD發(fā)病中起著關鍵作用，但其神經(jīng)損傷的具體機制尚不完全清楚，研

6、究提示，一氧化氮(nitricoxide,NO)可能與Aβ的神經(jīng)毒性有關。本研究用Aβ干預小膠質(zhì)細胞，觀測κ輕鏈核因子(nuclearfactorkappaB,NFκB)的表達以及NO水平的變化，探討Aβ誘導小膠質(zhì)細胞合成NO的機制。1材料和方法1.1材料1.1.1動物：出生3d內(nèi)的EM/F12培養(yǎng)基、胎牛血清（購自Hyclone公司），Aβ140、Aβ142（購自SIGMA公司），胰蛋白酶、TritonX100（購自Amresco公司），小鼠抗大鼠CD11b單克隆抗體（購自Serotec公司），兔抗NFκ

7、Bp65多克隆抗體（購自SANTACRUZ公司），抗小鼠及抗兔SP試劑盒和DAB顯色試劑盒（均購自北京中山生物技術有限公司）。1.2方法1.2.1小膠質(zhì)細胞分離、培養(yǎng)：在無菌條件下取出新生EM/F12培養(yǎng)基重新懸浮細胞，接種于多聚賴氨酸包被的50ml培養(yǎng)瓶中，置于37℃、含5%CO2、20%O2飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。原代混合膠質(zhì)細胞培養(yǎng)7～9d后，在37℃恒溫搖床上以250r/min振速搖動處理2.5h，將細胞懸液接種到已放置蓋玻片的培養(yǎng)皿中，37℃培養(yǎng)1h，棄未貼壁細胞，加新鮮培養(yǎng)基，培養(yǎng)5～7d即可使用。用免疫細

8、胞化學方法標記其特異性抗原CD11b進行細胞純度鑒定，小膠質(zhì)細胞比例占90%以上即符合要求。1.2.2Aβ的“老化（aged）”：用無菌三蒸水將Ａβ稀釋成0.5×105nmol/L，37℃孵育1周，使其變?yōu)榫奂癄顟B(tài)的Ａβ［１］。1.2.3小膠質(zhì)細胞的干預：培養(yǎng)皿中分別加入不同濃度的“老化”Ａβ140或Ａβ142，對照組則不加Ａ