金蓮花黃酮對人乳腺癌細(xì)胞作用的研究

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1、金蓮花黃酮對人乳腺癌細(xì)胞作用的研究作者：孫黎劉芳劉華羅強(qiáng)安芳【摘要】目的探討金蓮花黃酮對人乳腺癌MCF7細(xì)胞株細(xì)胞增殖抑制作用及對端粒酶活性的影響。方法不同濃度金蓮花黃酮作用于MCF7細(xì)胞24h，以CCK8法檢測細(xì)胞增殖抑制作用、流式細(xì)胞術(shù)檢測端粒酶活性。結(jié)果9.516、6.344、3.172、1.586、0.793mg/ml5個不同濃度金蓮花黃酮作用于MCF7細(xì)胞24h，對細(xì)胞增值的抑制率依次為17%、28%、48%、50%、55%。各實驗組A490與對照組比較差異均顯著（P＜0.05，P＜0.01)，且用藥濃度與抑制率呈正相關(guān)；端粒酶活性均有不同程度降低、且端粒酶活

2、性與用藥濃度成正比。結(jié)論金蓮花黃酮對MCF7細(xì)胞有明顯抑制作用并降低端粒酶活性?！娟P(guān)鍵詞】金蓮花黃酮；MCF7；CCK8；端粒酶活性　　【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheinhibitioneffectsandtelomeraseactivityofTrolliusflavonoidsonhumanbreastcancercelllineMCF7.MethodsMCF7cellsethod,andthetelomeraseactivityetry.ResultsTheinhibitionratesofMCF7cellprolife

3、rationentg/ml,respectively)for24h,andthereentalandcontrolgroups.Thereeraseactivityedegree,anderaseactivity.　　【Keyeraseactivity　　歐美國家新診斷的乳腺癌中≥65歲的病人約占一半〔1〕。在美國等西方國家及中國一些大中城市,乳腺癌已占居婦女惡性腫瘤死亡的首位〔2〕。近期研究表明金蓮花具有抗病毒、抗氧化活性〔3，4〕，黃酮類化合物還有抗癌、降壓和解痙作用〔5〕，臨床上用于治療慢性支氣管炎、泌尿系感染、急性呼吸道感染等〔6～8〕，具有良好功效。但對金蓮花黃銅的抗

4、腫瘤研究還未見報道。本研究主要探討金蓮花黃酮對人乳腺癌MCF7細(xì)胞增殖及對端粒酶活性的影響，從分子生物學(xué)水平揭示其作用機(jī)制，為金蓮花黃酮進(jìn)一步研究開發(fā)及臨床治療提供新的依據(jù)?！　?材料與方法　　1.1主要試劑和儀器MCF7細(xì)胞株由北京腫瘤研究所遺傳室提供，本院實驗中心細(xì)胞室傳代、凍存；CCK8為上海同仁化學(xué)產(chǎn)品；DMEM培養(yǎng)基為美國Gibco公司產(chǎn)品，胎牛血清購自天津市川頁生化制品有限公司,兔抗人端粒酶(Telomerase，TERT)單克隆抗體及熒光標(biāo)記山羊抗兔IgG(FITC)均為美國BD公司產(chǎn)品。其他試劑是國產(chǎn)分析純。美國StatFax2100酶標(biāo)儀,美國FACS

5、Aria流式細(xì)胞儀?！　?.2金蓮花黃酮的制備稱取5.0g經(jīng)清洗、烘干、去梗后粉碎的金蓮花，置于250ml圓底燒瓶中，按正交表，加入相應(yīng)的溶劑，充分振蕩，浸泡1h后于恒溫水箱中回流提?。扛?0min振蕩1次），過濾。再按同法二次提取，合并濾液，減壓濃縮，定容至25ml,8磅15min高壓滅菌4℃保存?！　?.3MCF7細(xì)胞培養(yǎng)于DMEM培養(yǎng)液中加入10%胎牛血清及100U/ml慶大霉素，用7.6%NaHCO2調(diào)至pH7.4，加入復(fù)蘇的MCF7細(xì)胞，置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。每2～3d換1次培養(yǎng)液。當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)生長期加入不同濃度金蓮花黃酮處理?！　?.4CCK

6、8法檢測金蓮花黃酮對腫瘤細(xì)胞的抑制作用取對數(shù)生長期密度為2×105/ml的MCF7細(xì)胞，接種于96孔培養(yǎng)板上，100μl/孔。用DMEM培養(yǎng)液將金蓮花黃酮稀釋成9.516、6.344、3.172、1.586、0.793mg/ml5個不同濃度，并分別加入96孔培養(yǎng)板（100μl/孔），每組設(shè)4個復(fù)孔，對照組加入等體積培養(yǎng)液，培養(yǎng)24h。實驗終止前4h每孔加入CCK820μl，10min后以酶標(biāo)儀檢測吸光度（A490值），按公式計算MCF7細(xì)胞抑制率。抑制率(%)=(1-實驗組平均A490值/對照組平均A490值)×100%。　　1.5不同濃度金蓮花黃酮對MCF7細(xì)胞TE

7、RT定量表達(dá)的測定取對數(shù)生長期MCF7細(xì)胞(密度為1×106/ml)分別接種于25只50ml的培養(yǎng)瓶，1.5ml/瓶，實驗組分別加入6.344，3.172，1.586mg/ml濃度的金蓮花黃酮1.5ml，對照組加入1.5ml培養(yǎng)液，空白組加入1.5mlPBS(pH7.4)，每個濃度設(shè)5個復(fù)孔。培養(yǎng)24h后,用4℃緩沖液離心1500r/min、7min洗2次(去上清),用4%多聚甲醛1ml懸起細(xì)胞,室溫孵育10min。同法用4℃緩沖液洗1次(去上清),加甲醇1ml懸起細(xì)胞,室溫孵育10min