雷帕霉素抑制小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病作用的初步研究

《雷帕霉素抑制小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病作用的初步研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。

1、雷帕霉素抑制小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病作用的初步研究【摘要】目的：探討新型免疫抑制藥物雷帕霉素（RAPA）對小鼠異基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病（aGVHD）的抑制作用,并與傳統(tǒng)免疫抑制藥物比較作用效果。方法：用主要組織相容性抗原(MHC)完全不合的純種近交系小鼠［供鼠為雄性C57BL/6J(H-2b)鼠,受鼠為雌性BALB/c(H-2d)鼠］建立allo-BMT/aGVHD動物模型，隨機(jī)分5組，第1、2和3組分別給予RAPA、環(huán)孢菌素A(CsA)加甲氨蝶呤(MTX)、RAPA加CsA加MTX聯(lián)合用

2、藥作為aGVHD抑制方案，第4組為空白對照，第5組為未移植組。觀察各組小鼠骨髓移植后aGVHD的出現(xiàn)情況。結(jié)果：移植小鼠出現(xiàn)典型的aGVHD癥狀，未用aGVHD預(yù)防方案的移植小鼠(第4組)死亡高峰在移植后第5～7天,死亡率達(dá)100%。用不同aGVHD預(yù)防方案的第1～3組小鼠aGVHD癥狀明顯減輕,平均生存時間(MST)較第4組顯著延長(分別延長3.5、1.9和6.0d,P<0.05)。不同aGVHD預(yù)防方案的移植小鼠之間，移植后外周血常規(guī)變化差異無顯著性。經(jīng)用各預(yù)防方案后,移植小鼠aGVHD病理表現(xiàn)減輕,且RAPA、

3、CsA和MTX聯(lián)合用藥組的病理分級輕于RAPA單藥組或CsA加MTX標(biāo)準(zhǔn)方案組。結(jié)論：RAPA可以顯著抑制體外T淋巴細(xì)胞增殖效應(yīng)，增強(qiáng)小鼠對骨髓移植的免疫耐受，對小鼠骨髓移植后移植物抗宿主?。℅VHD）有明顯抑制作用，可減輕GVHD癥狀和病理損害程度，延長平均生存時間。【關(guān)鍵詞】雷帕霉素；移植物抗宿主?。划惢蚬撬枰浦?；小鼠造血干細(xì)胞移植(hemopoieticstemcelltransplantation,HSCT)是目前治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤和非惡性遺傳性缺陷的重要手段。對于許多沒有相關(guān)全相合或無關(guān)全相合骨髓供者的惡性血

4、液病患者來說，用半相合的親屬或部分相合無關(guān)供者的骨髓作為干細(xì)胞來源，成為治療惡性血液病的必然選擇。但同種異體HSCT后移植物抗宿主病(graft-versus-hostdisease,GVHD)的發(fā)生率為50%～80%，移植相關(guān)死亡率約30%，嚴(yán)重影響患者的生存時間和生存質(zhì)量，是臨床異基因干細(xì)胞移植的障礙之一［1］。研究降低或減輕GVHD的發(fā)生率及程度的方法，對臨床HSCT有重要意義。選用較強(qiáng)的聯(lián)合免疫抑制方案預(yù)防和治療HSCT后異基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)成為解決問題的方法之一。本實(shí)驗研究新型免疫抑制

5、藥物雷帕霉素(rapamycin,RAPA)對aGVHD的防治作用及其初步作用機(jī)制,選擇C57BL/6J鼠(H-2b)、BALB/c鼠(H-2d)分別作為不相合基因移植的供、受者，建立aGVHD模型。用RAPA以及聯(lián)合環(huán)孢菌素A(CsA)加甲氨蝶呤(MTX)對aGVHD的抑制作用進(jìn)行了小鼠實(shí)驗觀察。1材料1.1實(shí)驗動物供鼠：純種近交系小鼠C57BL/6J(H-2b),雄性,清潔級,8～12周齡,購自揚(yáng)州大學(xué)動物中心。受鼠：純種近交系小鼠BALB/c(H-2d),雌性,清潔級,8～12周齡,購自揚(yáng)州大學(xué)動物中心。小鼠飼養(yǎng)于東

6、南大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院SPF級動物房內(nèi)。墊料經(jīng)高溫消毒,移植后20d內(nèi)每天更換墊料,飼料經(jīng)60Co照射滅菌,飲水中加入紅霉素250mg·L-1、慶大霉素320mg·L-1，于移植前5d開始飲用。1.2主要試劑RAPA為美國惠氏制藥公司產(chǎn)品,CsA為瑞士Sandoz公司產(chǎn)品,MTX為上海華聯(lián)制藥公司產(chǎn)品。2方法2.1全身照射采用60Co(南京市第二醫(yī)院放療中心)γ射線作全身照射,劑量率500cGy·min-1,總劑量8.0Gy。2.2骨髓移植無菌條件下采集C57BL/6J小鼠股骨，用注射器吸取RPMI1640培養(yǎng)液反復(fù)沖洗骨髓腔

7、制成細(xì)胞懸液，過4號針頭使之成為單細(xì)胞懸液,采用淋巴細(xì)胞分離液(密度1.083g·ml-1)分離單個核細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×108ml-1。將脾臟在200目篩網(wǎng)上研磨成單個細(xì)胞，0.83%NH4Cl溶解紅細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞濃度為1×108ml-1。受鼠BALB/c在全身照射后6～8h接受骨髓移植(經(jīng)尾靜脈輸注骨髓和脾細(xì)胞懸液0.2ml·只-1)。2.3實(shí)驗動物分組小鼠隨機(jī)分為第1、2、3、4、5共5組，每組10只：(1)第1組小鼠RAPA1.5mg·kg-1·d-1灌胃，從移植后第1天(+1d)開始用藥；(2)第2組小鼠給予

8、CsA加MTX，CsA1.5mg·kg-1·d-1腹腔注射，從移植后+1d開始用藥，當(dāng)小鼠的胃腸功能逐漸恢復(fù)后改為CsA5mg·kg-1·d-1灌胃，MTX0.4mg·kg-1·d-1腹腔注射，移植后+1,+3,+6,+11d用藥；(3)第3組小鼠給予RAPA(1.5mg·kg-1·d-1)聯(lián)合CsA+