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1、開(kāi)口箭提取物細(xì)胞毒活性研究【摘要】目的通過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，探討開(kāi)口箭提取物的細(xì)胞毒活性，為進(jìn)行深層次研究提供依據(jù)。方法采用四甲基偶氮唑鹽（MTT）比色法。結(jié)果開(kāi)口箭甲醇提取物、總皂苷、30%總皂苷和70%總皂苷對(duì)HL-60和Caski細(xì)胞的抑制作用顯著，與陰性對(duì)照相比（P<0.05）,對(duì)HL-60細(xì)胞的抑制率達(dá)到60.12%，72.25%，89.09%，95.17%，其IC50為65.57，45.07，35.40，22.89μg/ml。對(duì)Caski細(xì)胞的抑制率達(dá)到63.94%，71.48%，62.4
2、9%，73.43%，其IC50為108.42，84.53，41.02，47.19μg/ml。結(jié)論開(kāi)口箭提取物對(duì)HL-60和Caski細(xì)胞具有明顯的抑制作用?！娟P(guān)鍵詞】開(kāi)口箭；皂苷；MTT法；細(xì)胞毒活性 Abstract：ObjectiveToobservethecytotoxicitiesoftheextractsofTupistrachinensisBak.ethodsonHL-60andCaskitumorcells.ResultsTheinhibitioneffectoftheextractsof
3、TupistrachinensisBak.,totalsaponins,30%totalsaponinsand70%totalsaponinsonHL-60andCaskicellsinent,paredodelgroup(P<0.05).ThEirinhibitionratiosonHL-60tumorcellsl.TheirinhibitionratiosonCaskicellsl.ConclusionTheextractsofTupistrachinensisBak.havesignifican
4、tcytotoxicityonHL-60andCaskitumorcells. Keyethod；Cytotoxicity 開(kāi)口箭（TupistrachinensisBak.）系百合科Liliaceae鈴蘭族開(kāi)口箭屬植物，為著名的傳統(tǒng)中藥，主治勞熱咳嗽、跌打損傷、風(fēng)濕痹痛等癥，民間用于治療咽喉炎、扁桃體炎等?，F(xiàn)證明開(kāi)口箭具有祛痰、抗炎、抑菌及醒酒作用［1，2］?！ ”緦?shí)驗(yàn)室通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)湖北省產(chǎn)開(kāi)口箭含有甾體皂苷和甾體皂苷元,且含量較高［3］。皂苷具有增強(qiáng)免疫功能、抗輻射、抑制腫瘤生長(zhǎng)、抗炎、降血糖等廣泛
5、的生物學(xué)活性,近年越來(lái)越受人們的普遍關(guān)注。有研究證實(shí)開(kāi)口箭同屬植物皂苷成分有細(xì)胞毒活性［4，5］。本文旨在通過(guò)體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn),觀察開(kāi)口箭提取物對(duì)HL-60和Caski細(xì)胞的細(xì)胞毒活性,現(xiàn)報(bào)告如下?！ ?材料 1.1細(xì)胞株人急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞（HL-60）、人宮頸鱗狀上皮癌細(xì)胞(Caski)均由三峽大學(xué)免疫教研室提供?！ ?.2藥品與儀器RPMI-1640為美國(guó)GIBCO公司產(chǎn)品；新生小牛血清為杭州四季青生物材料有限公司產(chǎn)品；HEPES為美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品，胰蛋白酶為美國(guó)GIBCO公司產(chǎn)品；四氮唑
6、藍(lán)(MTT)為美國(guó)AMRESCO公司產(chǎn)品；絲裂霉素(MMC，浙江海正藥液股份有限公司，批號(hào)：051211)；酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(GENIOSTECAN)；CO2培養(yǎng)箱（日本三洋公司）；LD4-2A離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)；96孔板(美國(guó)Cornning公司)?！ ￠_(kāi)口箭根莖于2002-07采自湖北省神農(nóng)架林區(qū)，經(jīng)三峽大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院陳發(fā)菊副教授鑒定為TupistrachinensisBak.，標(biāo)本存放于湖北省天然產(chǎn)物研究與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（編號(hào)：TC200207SNJ）?！ ?.3藥物制備開(kāi)口箭根莖粉碎后
7、，用甲醇回流提取3次，合并3次提取液，濃縮后經(jīng)石油醚脫脂用水飽和的正丁醇萃取，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收正丁醇，濃縮液抽干后即得到開(kāi)口箭總皂苷，配成水液，過(guò)大孔樹(shù)脂柱，水洗，30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇梯度洗脫，得開(kāi)口箭四部分皂苷?！ 》謩e取開(kāi)口箭甲醇提取物、開(kāi)口箭總皂苷、30%開(kāi)口箭皂苷、70%開(kāi)口箭皂苷4個(gè)樣品，用含10%滅活的新生小牛血清RPMI-1640培養(yǎng)液將其配制成所需濃度，依次為62.5,125,250,500,1000,2000μg/ml。絲裂霉素(MMC)用含10%滅活的新生小牛血清RPMI-16
8、40培養(yǎng)液將其配置為250μg/ml。所有受試樣品均用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌?！ ?方法 2.1細(xì)胞培養(yǎng)HL-60和Caski細(xì)胞用RPMI-1640培養(yǎng)液（另加10mmol/LHEPES,2.0mg/mlNaHCO3，100U/ml青霉素，100μg/ml鏈霉素和10%新生小牛血清），于CO2孵箱中37℃，5%CO2飽和濕度下培養(yǎng)。貼壁細(xì)胞用含0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶消化傳代。 2.2M
