乙酰肝素酶基因表達(dá)增強(qiáng)大腸癌轉(zhuǎn)化細(xì)胞侵襲能力的實(shí)驗(yàn)研究

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1、乙酰肝素酶基因表達(dá)增強(qiáng)大腸癌轉(zhuǎn)化細(xì)胞侵襲能力的實(shí)驗(yàn)研究【關(guān)鍵詞】乙酰肝素酶　　TheEnhancedEffectofHeparanaseGeneExpressionontheInvasiveAbilityofColorectalCancerTransformedCell　　Abstract：ObjectiveThisstudyancolorectalcancercelllinesHT29.Thecellgrober.Tumorigencityandorthotopicimplantationofhistologicallyintactt

2、umorinnudemice'sileocecaljunctionindicatedtheinvasiveabilityofcolorectalcancertransformedcellbytheexogenousexpressionofheparanasegene.ResultsAfterbEingtransfectedbertestongthreekindsofcells.Inthesametime,theentityneoplasmm×9mm×10mm）islargerthanthecontrolgroup（6mm×8mm×6mm

3、）.Theincidencesofthelivermetastases（71.43%）ishigherthanthecontrolgroup（14.29%）.TherateoftumorigencityandmetastasisinnudemiceanexogenousheparanasegenecanfacilitatetoenhancethegroetastasisincelllineHT29.　　Key；Transfection；Metastasis　　摘要：目的探討外源性乙酰肝素酶基因?qū)υ鰪?qiáng)大腸癌HT29細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲能力的影響。

4、方法乙酰肝素酶(Heparanase，Hpa)基因真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染大腸癌HT29細(xì)胞，觀察轉(zhuǎn)化細(xì)胞增殖和侵襲能力的變化，通過轉(zhuǎn)化細(xì)胞裸鼠異種接種成瘤和實(shí)體瘤回盲部原位種植轉(zhuǎn)移模型建立，觀察乙酰肝素酶mRNA的表達(dá)對(duì)大腸癌HT29細(xì)胞侵襲性的影響。結(jié)果乙酰肝素酶基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞HT29Hpa較未轉(zhuǎn)染細(xì)胞HT29和轉(zhuǎn)染空載細(xì)胞HT29KZ生長(zhǎng)速度明顯加快；Boyden小室體外侵襲實(shí)驗(yàn)顯示HT29Hpa細(xì)胞穿膜數(shù)（45.5±0.501）較HT29細(xì)胞（29.3±0.062）和HT29KZ細(xì)胞（30.1±0.247）增多，差異具有顯著性(P

5、<0.01)；轉(zhuǎn)染細(xì)胞裸鼠皮下瘤生長(zhǎng)速度明顯加快；同期內(nèi)HT29Hpa細(xì)胞形成的皮下瘤（12mm×9mm×10mm）較HT29細(xì)胞皮下瘤（6mm×8mm×6mm）大，HT29Hpa細(xì)胞皮下瘤回盲部原位種植致肝轉(zhuǎn)移率（71.43%）較HT29細(xì)胞肝轉(zhuǎn)移率（14.29%）增高。兩者間差異有顯著性意義(P<0.01)。結(jié)論乙酰肝素酶基因外源性的表達(dá)，能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移。　　關(guān)鍵詞：乙酰肝素酶；大腸癌；轉(zhuǎn)染；轉(zhuǎn)移　　0引言　　乙酰肝素酶（heparanase）是一種廣泛存在于細(xì)胞外基質(zhì)、密切參與腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和侵襲轉(zhuǎn)

6、移的葡萄糖醛酸酯酶，通過降解細(xì)胞外基質(zhì)（extracellulermatrices，ECM）和基底膜（basementmembrane,BM）上起穩(wěn)定作用的乙酰肝素（HeparanSulfateProteoglycans，HSPGs），破壞基質(zhì)正常的結(jié)構(gòu)，使腫瘤組織易于擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移[1,2]。研究表明，在原位癌、微浸潤(rùn)癌和浸潤(rùn)癌中都出現(xiàn)不同程度乙酰肝素酶的表達(dá)和基底膜的崩解[2]，腫瘤細(xì)胞中乙酰肝素酶的表達(dá)量與腫瘤浸潤(rùn)的深度存在相關(guān)性[3]。HT29細(xì)胞源于人大腸癌組織，為低分化腺癌，體外培養(yǎng)生長(zhǎng)緩慢，轉(zhuǎn)移率低。本研究將自行設(shè)計(jì)和構(gòu)建的乙

7、酰肝素酶真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染大腸癌HT29細(xì)胞，觀察轉(zhuǎn)化細(xì)胞生物學(xué)特性變化，探討乙酰肝素酶mRNA的表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力的影響。　　1材料和方法　　1.1主要試劑　　Trizol、DMEM、脂質(zhì)體購自Gibco公司；MTT、G418購自Sigma公司；RTPCR試劑盒購自MBI公司；Matrigel凝膠及侵襲小室購自BD公司?！　∫阴８嗡孛富蛘婧吮磉_(dá)載體（pcDNA3Hpa）由本室構(gòu)建，該重組質(zhì)粒系由pcDNA3的EcoRⅠ位點(diǎn)間插入基因全長(zhǎng)序列構(gòu)成。地高辛加尾寡核苷酸標(biāo)記盒，購自德國保靈曼公司。原位雜交試劑盒及免疫組化試劑盒

8、，均購自武漢博士德公司。大腸癌細(xì)胞株HT29由第四軍醫(yī)大學(xué)消化病研究所保存；Balb/C（nu/nu）裸鼠購自中英合資上海西普－必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，屬T細(xì)胞缺乏型?！　?.2基因轉(zhuǎn)染　　參照Lipofec