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《漢坦病毒核衣殼蛋白抗原多肽片段的合成與應(yīng)用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、漢坦病毒核衣殼蛋白抗原多肽片段的合成與應(yīng)用【關(guān)鍵詞】腎綜合征出血熱 關(guān)鍵詞:腎綜合征出血熱;漢坦病毒;病毒殼體;表位作圖;肽合成;酶聯(lián)免疫吸附測定 摘要:目的以合成肽為抗原建立新型特異性檢測抗?jié)h坦病毒IgG和IgM的ELISA.方法用多肽合成儀合成漢坦病毒核衣殼蛋白（aa17-66）50個氨基酸殘基的核心序列，以此為抗原，通過實驗發(fā)現(xiàn)這一序列具有較強的抗原性，首次建立了以合成肽為抗原的新型特異性檢測抗?jié)h坦病毒IgG和IgM的ELISA.測定腎綜合征出血熱（HFRS）患者血清23份，乙型肝炎患者血清9份，正常人血清11份.結(jié)果乙
2、型肝炎患者血清和正常人血清均為陰性，20份HFRS血清IgG陽性，21份HFRS血清IgM陽性.本方法的相對敏感性為86%和91%，相對特異性為100%，符合率為93%和95%.結(jié)論本法特異性強，靈敏度高，簡便易行，是適于基層醫(yī)療單位的診斷方法. Keyorrhagicfevere;Hantaan-virus;capsid;epitopemapping;peptidesynthe-sis;enzyme-linkedimmunostorbentassay 漢坦病毒核衣殼蛋白抗原多肽片段的合成與應(yīng)用【關(guān)鍵詞】腎綜合征出血熱 關(guān)鍵
3、詞:腎綜合征出血熱;漢坦病毒;病毒殼體;表位作圖;肽合成;酶聯(lián)免疫吸附測定 摘要:目的以合成肽為抗原建立新型特異性檢測抗?jié)h坦病毒IgG和IgM的ELISA.方法用多肽合成儀合成漢坦病毒核衣殼蛋白（aa17-66）50個氨基酸殘基的核心序列，以此為抗原，通過實驗發(fā)現(xiàn)這一序列具有較強的抗原性，首次建立了以合成肽為抗原的新型特異性檢測抗?jié)h坦病毒IgG和IgM的ELISA.測定腎綜合征出血熱（HFRS）患者血清23份，乙型肝炎患者血清9份，正常人血清11份.結(jié)果乙型肝炎患者血清和正常人血清均為陰性，20份HFRS血清IgG陽性，21份H
4、FRS血清IgM陽性.本方法的相對敏感性為86%和91%，相對特異性為100%，符合率為93%和95%.結(jié)論本法特異性強，靈敏度高，簡便易行，是適于基層醫(yī)療單位的診斷方法. Keyorrhagicfevere;Hantaan-virus;capsid;epitopemapping;peptidesynthe-sis;enzyme-linkedimmunostorbentassay Abstract:AIMToestablishaneethodtotestHFRS.METHODSEpitope（aa17-66）ofnucleoc
5、apsidproteinHFRSpatients，9fromHBVpatientsand11fromhealthypeopleHBVpatientsandhealthypeopleHFRSpatientsforanti-HVIgGpositiveand21serafromHFRSpatientsforanti-HVIgMpositive.Sensitivityoftheresultsple，fast，highlyspecificandsensitivemethodsuitableforearlydiagnosisofHFRSinf
6、ectedpeople. 0引言 腎綜合征出血熱（HFRS）為布尼亞病毒科漢坦病毒屬病毒（Hantavirus，HV）引起的自然疫源性傳染病，我國是HFRS流行的主要國家［1-3］.HV基因組由L，M，S三個片段構(gòu)成，分別編碼病毒RNA聚合酶、囊膜糖蛋白G1和G2及核衣殼蛋白（簡稱核蛋白，Nucleocapsidprotein，NP）［4，5］.囊膜糖蛋白上具有中和及血凝抗原位點，可誘導(dǎo)中和抗體和保護性細胞免疫反應(yīng);核蛋白上雖無中和性抗原位點，但仍可誘導(dǎo)保護性細胞免疫，現(xiàn)有研究表明，在核蛋白上也可能有中和性抗原位點存在［6，7
7、］.血清學研究表明，漢坦病毒核蛋白具有很強的抗原性和免疫原性，患者對核蛋白的抗體不僅出現(xiàn)早，且滴度高［8］.應(yīng)用單克隆抗體進行的研究表明，抗NP血清或單抗雖然沒有中和活性，但用NP免疫的動物仍可產(chǎn)生一定的抗病毒免疫［9-11］.此外還發(fā)現(xiàn)抗NP血清或單抗可與多種血清型病毒抗原產(chǎn)生交叉反應(yīng)，而NP抗原也可與漢坦病毒屬內(nèi)的多種血清型病毒的免疫血清產(chǎn)生交叉反應(yīng)，表明漢坦病毒NP具有共同的抗原決定簇［12，13］.Vapalahti等［9］應(yīng)用PERSCAN技術(shù)，對連續(xù)交錯合成的覆蓋NP全長的141個14肽進了免疫檢測，用兔抗?jié)h坦病毒免疫
8、血清檢測后發(fā)現(xiàn)了6個多肽抗原線性表位，同時用14份急性期和2份恢復(fù)期患者血清進行NP表位抗原檢測，發(fā)現(xiàn)具有共同反應(yīng)的抗原表位主要集中在NP氨基酸序列的親水區(qū).Gott和Elgh等［14，15］分別應(yīng)用重組DNA技術(shù)表達NP的部分片段，并進行免疫學測
