甲胎蛋白對人肝癌bel7402細胞caspase信號傳遞及耐受trail的影響

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1、甲胎蛋白對人肝癌Bel7402細胞caspase信號傳遞及耐受TRAIL的影響：李孟森，詹志農(nóng)，周升，劉新華，李剛【摘要】目的研究甲胎蛋白(AFP)對人肝癌Bel7402細胞內(nèi)caspase信息通路信號傳遞的影響，以及對腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體(TRAIL)誘導肝癌細胞凋亡的對抗作用。方法激光共聚焦顯微鏡觀察AFP與caspase3、caspase8在Bel7402細胞內(nèi)的共定位；免疫共沉淀(CoIP)技術(shù)研究AFP與caspase3、caspase8的相互作用；RNA干擾(RNAi)技術(shù)封阻AFP表達，并用TT法分析干擾AFP表達30h后再給予TRAIL(2nmol/

2、L)處理24h，Bel7402細胞的生長情況，并用熒光顯微鏡觀察經(jīng)TRAIL處理后肝癌細胞的凋亡狀況。結(jié)果共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)AFP、caspase3、caspase8主要表達于Bel7402細胞的細胞質(zhì)，發(fā)現(xiàn)AFP能與caspase3共定位于細胞質(zhì)，但與caspase8在細胞質(zhì)的共定位可能性很?。籆oIP技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)AFP能與caspase3結(jié)合，但不能與caspase8結(jié)合；2nmol/L劑量的TRAIL單獨處理Bel7402細胞并不能顯著改變caspase3活性，但能提升caspase8活性，而用全反式維甲酸(ATRA)40μmol/L加TRAIL(2nmol

3、/L)處理時，則能提高Bel7402細胞caspase3活性；干擾AFP表達后，單獨用TRAIL(2nmol/L)也能激活caspase3，而干擾AFP表達前后對caspase8活性沒有顯著性改變；MTT分析發(fā)現(xiàn)，2nmol/L劑量的TRAIL對Bel7402細胞的生長并沒有顯著性抑制作用，但是干擾AFP表達后TRAIL(2nmol/L)能明顯抑制Bel7402細胞生長(抑制率為48.4%)；熒光顯微鏡觀察表明，干擾AFP表達后TRAIL(2nmol/L)能誘導Bel7402細胞凋亡。結(jié)論AFP選擇性抑制caspase3活性是阻斷人肝癌Bel7402細胞內(nèi)凋亡信息傳遞的重要機

4、制，也是AFP抵抗TRAIL誘導肝癌細胞凋亡的關(guān)鍵環(huán)節(jié)?！娟P(guān)鍵詞】甲胎蛋白；腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體；腫瘤耐藥；肝癌細胞；caspase信息通路ABSTRACT:ObjectiveToexploretheeffectsofalphafetoprotein(AFP)onthetransductionofapoptoticsignalinhepetocellularcancinomacells(HCC)andtheroleofAFPincounteractingtheapoptosisinducedbytumornecrosisfactorrelatedapoptosisind

5、ucingligand(TRAIL)ofHCC.MethodsLaserconfocalmicroscopymunoprecipitation(CoIP)olecules,caspase3orcaspase8.ShortsmallRNAinterfering(siRNA)techniqueetricmethods.Bel7402cellsSupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina(No.30660071,30760090,30671856,30772536)andtheFoundationofNationalEdu

6、cationMinistryforGraduateProgramofChina(No.20070001735)inisteredol/L)for24hafterknockdoicroscopy.ResultsAFPcouldinteract,butcouldnotbindol/L)plusTRAIL(2nmol/L)alsoenhancedtheactivityofcaspase3orcaspase8,ol/L)alonefor24h,theactivityofcaspase8entol/L),theactivityofcaspase3ainedthesameasknockd

7、oicroscopy.ConclusionAFPcanblockthetransductionofapoptoticsignalbyselectivelyinhibitingtheactivityofcaspase3,andthisisalsothepivotaleventthatAFPcounteractstheapoptosisinducedbyTRAILofhepatomacells.KEYS1143P0)為LabVisionCorporati