腎清飲對腺嘌呤致腎間質(zhì)纖維化大鼠腎臟tgfβ1及timp1表達(dá)的影響

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1、腎清飲對腺嘌呤致腎間質(zhì)纖維化大鼠腎臟TGFβ1及TIMP1表達(dá)的影響【關(guān)鍵詞】腎清飲;腎間質(zhì)纖維化;轉(zhuǎn)化生長因子β1;金屬蛋白酶組織抑制物1　　ABSTRACT:ObjectiveTostudythepossiblemechanismofShenqingyinsinhibitingrenalinterstitialfibrosis.MethodsRenalinterstitialfibrosisinratsinistrationofadenine,andthentheratsunderadethepathologicalexaminationofrenaltissue

2、s,usedimmunohistochemistryandRTPCRtoobservetheexpressionsoftransforminggroetalloproteinase1(TIMP1)inrenaltissues.ResultsThedegreeofrenalinterstitialfibrosisilderinShenqingyingroupthaninmodelcontrolgroup.ImmunohistochemistryandRTPCRresultsshoodelcontrolgroup(P<0.05).ConclusionShenqing

3、yincaninhibitrenalinterstitialfibrosisbydecreasingtheexpressionsofTGFβ1andTIMP1inthekidney.　　KEYP1)　　腎間質(zhì)纖維化是各種原因引起的腎臟疾病持續(xù)進(jìn)展并最終發(fā)展成為終末期腎病的共同途徑和主要病理基礎(chǔ)[1]。腎間質(zhì)纖維化的治療藥物種類較多，但療效并不滿意。中藥腎清飲的臨床觀察結(jié)果顯示，該藥能有效地保護(hù)腎功、延緩腎衰竭的進(jìn)展。本研究通過建立腺嘌呤灌胃致大鼠腎間質(zhì)纖維化模型，給予中藥腎清飲干預(yù)治療，觀察腎清飲對腎組織轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforminggroetallopro

4、teinase1,TIMP1)的影響，探討腎清飲抗腎間質(zhì)纖維化的部分機(jī)制?！　?材料與方法　　1.1實(shí)驗(yàn)動物、主要試劑及藥品雄性SD大鼠56只，體重180～200g，清潔級，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。造模試劑藥品：腺嘌呤(Amerisco公司);腎清飲(黃芪、當(dāng)歸、川芎、藏紅花、大黃、芍藥、地龍等中藥組成)，制成水煎濃縮液，每毫升含生藥2.4g，4℃冰箱保存?zhèn)溆?鹽酸苯那普利(北京諾華制藥有限公司)。ET1放免試劑盒(北京科美東雅生物技術(shù)有限公司)。RTPCR試劑：總RNA提取Trizol試劑(Invitrogen公司)，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒及TaqDNA聚合酶(

5、Fermentas/MBI公司)。引物設(shè)計：①3磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)上游5′CATAGACAAGATGGTGAAGG3′，下游5′TCCACAGTCTTCTGAGTGGC3′，570bp;②COLⅠ上游5CCTACAGCACGCTTGTGGAT3，下游5′ATTGGGATGGAGGGAGTTTA3′，193bp;③COLⅢ上游5′TCAAGAGCGGAGAATACTGG3′，下游5′TATGTAATGTTCTGGGAGGC3′，295bp;④TGFβ1上游5′AGCCTGCTTCTTGAGTC3′，下游5′AGGAAAGGTAG

6、GTGATA3′，241bp。引物由上海生物工程公司合成?！　?.2動物分組和標(biāo)本采集56只SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組、模型組、腎清飲預(yù)防組、腎清飲低劑量組、腎清飲高劑量組、鹽酸苯那普利組、腎清飲+鹽酸苯那普利組，共7組，每組8只，其中后5組統(tǒng)稱藥物干預(yù)組。腺嘌呤：腺嘌呤用20g/L淀粉懸液配成，灌胃劑量250mg/(kg·d);腎清飲(低)：按生藥折算每100g大鼠體重灌胃腎清飲1g/d;腎清飲(高)：按生藥折算每100g大鼠體重灌胃腎清飲3g/d;鹽酸苯那普利：鹽酸苯那普利灌胃10mg/(kg·d)。造模過程中正常對照組、腎清飲低劑量組、腎清飲+鹽酸苯那普利組各死亡大鼠

7、1只，模型組死亡2只。6周結(jié)束前1d，將大鼠置于代謝籠中收集24h尿液。6周結(jié)束時乙醚麻醉大鼠，下腔靜脈采靜脈血，取雙腎，部分置于40g/L多聚甲醛固定，部分液氮凍存。　　1.3病理染色及免疫組化檢測固定于40g/L多聚甲醛的腎組織，經(jīng)脫水，包埋，切成4μm的切片，進(jìn)行HE、Masson病理染色，并行SABC法免疫組化染色檢測TGFβ1及TIMP1，操作按照說明書進(jìn)行;采用德國LeicaQP1引物，在TaqDNA聚合酶催化下進(jìn)行PCR，取8μLPCR產(chǎn)物在15g/L瓊脂糖凝膠上電泳，美國SYNGE